GB/T 21674-2008豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)方法

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２１６７４—２００８

豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)方法

犇犲狋犲犮狋犻狀犵狆狅狉犮犻狀犲犮犻狉犮狅狏犻狉狌狊狑犻狋犺狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀

２００８０４０９發(fā)布２００８０６０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書(shū)

犌犅／犜２１６７４—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)診斷中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：田克恭、王宏偉、孫明、王傳彬、陳西釗。

Ⅰ

書(shū)

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引言

豬圓環(huán)病毒依據(jù)其致病性和基因組差異分為無(wú)致病性的豬圓環(huán)病毒Ⅰ型（ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅｌ，

ＰＣＶ１）和有致病性的豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２，ＰＣＶ２）。ＰＣＶ２是引發(fā)仔豬斷奶后多

系統(tǒng)衰弱綜合征（ｐｏｓｔｗｅａｎｉｎｇｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍｗａｓｔｉｎｇｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＭＷＳ）的主要病原。該病主要以患畜

生長(zhǎng)遲緩、進(jìn)行性消瘦和多系統(tǒng)病理?yè)p傷為特征，給世界各國(guó)主要養(yǎng)豬地區(qū)的規(guī)?；B(yǎng)豬業(yè)造成了一定

的經(jīng)濟(jì)損失。

Ⅱ

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豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬圓環(huán)病毒（ＰＣＶ）聚合酶鏈反應(yīng)（ＰＣＲ）檢測(cè)方法的技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬血清和組織中的豬圓環(huán)病毒檢測(cè)，以及其Ⅰ型（ＰＣＶ１）和Ⅱ型（ＰＣＶ２）的鑒別。

２實(shí)驗(yàn)室生物安全要求

試驗(yàn)操作應(yīng)在生物安全Ⅱ級(jí)（ＢＳＬ２級(jí)）以上的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

３實(shí)驗(yàn)材料、儀器設(shè)備和試劑

３．１實(shí)驗(yàn)材料

眼科剪、眼科鑷、稱(chēng)量紙、１０ｍＬ一次性注射器、１．５ｍＬ滅菌離心管、０．２ｍＬ薄壁ＰＣＲ管、瓊脂糖、

５００ｍＬ量筒、５００ｍＬ錐形瓶、吸頭（１０μＬ、２００μＬ、１０００μＬ）、滅菌雙蒸水。

３．２儀器設(shè)備

分析天平、高速離心機(jī)、真空干燥器、ＰＣＲ擴(kuò)增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀（或紫外分析

儀）、液氮罐或－７０℃冰箱、微波爐、組織研磨器、－２０℃冰箱、水浴鍋、可調(diào)移液器（最大量程為２μＬ、

２０μＬ、２００μＬ、１０００μＬ）。

３．３試劑

本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑，除特殊標(biāo)注外，均為分析純。

３．３．１消化液（見(jiàn)第Ａ．１章）。

３．３．２２％蛋白酶Ｋ溶液（見(jiàn)第Ａ．２章）。

３．３．３酚三氯甲烷異戊醇混合液（見(jiàn)第Ａ．３章）。

３．３．４２．５ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ（見(jiàn)第Ａ．４章）。

３．３．５１０ｐｍｏｌ／μＬＰＣＶ引物（見(jiàn)第Ａ．５章）。

３．３．６０．５Ｕ／μＬＴａｑＤＮＡ聚合酶（見(jiàn)第Ａ．６章）。

３．３．７１０倍ＰＣＲ緩沖液（見(jiàn)第Ａ．７章）。

３．３．８溴化乙錠（ＥＢ）溶液（見(jiàn)第Ａ．８章）。

３．３．９電泳緩沖液（５０倍）（見(jiàn)第Ａ．９章）。

３．３．１０１％瓊脂糖凝膠（見(jiàn)第Ａ．１０章）。

３．３．１１上樣緩沖液（見(jiàn)第Ａ．１１章）。

３．３．１２異丙醇。

３．３．１３７５％乙醇（見(jiàn)第Ａ．１２章）。

３．３．１４１５ｍｍｏＬ／Ｌ氯化鎂（見(jiàn)第Ａ．１３章）。

３．３．１５滅菌雙蒸水（見(jiàn)第Ａ．１４章）。