標準解讀
《GB/T 40225-2021 肌動蛋白抗體的檢測 免疫印跡法》是一項國家標準,該標準規定了通過免疫印跡法(Western Blot)來檢測肌動蛋白抗體的具體方法。適用于醫學研究、臨床診斷等領域中對于肌動蛋白抗體存在與否及其濃度水平進行測定。
在準備階段,首先需要確保所有實驗材料和試劑的質量符合要求,包括但不限于抗原、一抗、二抗、封閉液等,并且操作環境需達到生物安全實驗室的相關要求。樣品處理過程中,根據待測樣本類型不同,可能涉及細胞裂解物制備或血清直接使用等步驟。關鍵在于保證目標蛋白質能夠有效提取并保持其天然狀態下的結構特性。
接下來是電泳分離環節,采用SDS-PAGE技術將混合物中的各種蛋白質按照分子量大小區分開來。之后通過轉移膜裝置把已分離好的蛋白質從凝膠轉移到固相支持介質上,通常為硝酸纖維素膜或PVDF膜。此過程需注意控制電流強度及時間以獲得最佳轉印效果。
完成轉移后進入免疫反應階段,首先是用適當濃度的一抗溶液與膜上的特異性抗原結合;經過洗滌去除未結合的一抗后,再加入帶有標記物的二抗,使其識別并與一抗形成復合體。最后通過化學發光或其他顯色系統顯示出陽性條帶的位置,從而判斷是否存在針對肌動蛋白的特異性抗體以及它們的大致含量。
整個流程強調了實驗條件的選擇、操作規范性以及結果判讀的重要性。每一步驟都需嚴格按照標準給出的方法執行,以保證數據準確可靠。此外,還應定期對儀器設備進行校準維護,確保長期穩定運行。
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....
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- 現行
- 正在執行有效
- 2021-05-21 頒布
- 2021-12-01 實施
文檔簡介
ICS07080
CCSA.40
中華人民共和國國家標準
GB/T40225—2021
肌動蛋白抗體的檢測免疫印跡法
Determinationofactinantibody—Westernblottingmethod
2021-05-21發布2021-12-01實施
國家市場監督管理總局發布
國家標準化管理委員會
中華人民共和國
國家標準
肌動蛋白抗體的檢測免疫印跡法
GB/T40225—2021
*
中國標準出版社出版發行
北京市朝陽區和平里西街甲號
2(100029)
北京市西城區三里河北街號
16(100045)
網址
:
服務熱線
:400-168-0010
年月第一版
20215
*
書號
:155066·1-67373
版權專有侵權必究
GB/T40225—2021
前言
本文件按照標準化工作導則第部分標準化文件的結構和起草規則的規定
GB/T1.1—2020《1:》
起草
。
請注意本文件的某些內容可能涉及專利本文件的發布機構不承擔識別專利的責任
。。
本文件由全國生化檢測標準化技術委員會提出并歸口
(SAC/TC387)。
本文件起草單位中國測試技術研究院成都正能生物技術有限責任公司深圳市第二人民醫院
:、、、
甘肅中商食品質量檢驗檢測有限公司深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司上海市計量測試技術研
、、
究院
。
本文件主要起草人李懷平周李華邱俊康馬麗俠顧大勇張秦川張譯文蔣子敬王偉葉德萍
:、、、、、、、、、、
何海寧洪霞劉剛
、、。
Ⅰ
GB/T40225—2021
肌動蛋白抗體的檢測免疫印跡法
1范圍
本文件描述了肌動蛋白抗體的免疫印跡檢測方法
。
本文件適用于基于免疫印跡法原理的肌動蛋白抗體的測定
。
2規范性引用文件
下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款其中注日期的引用文
。,
件僅該日期對應的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于
,;,()
本文件
。
分析實驗室用水規格和試驗方法
GB/T6682
3術語和定義
下列術語和定義適用于本文件
。
31
.
肌動蛋白actin
一類形成微絲的球狀多功能蛋白質細胞骨架的主要成分廣泛表達于真核細胞中
,,。
注1目前發現肌動蛋白至少存在種異構體形式主要分布在心肌骨骼橫紋肌和平滑肌組織中調控細胞的收縮
:6,、,
能力也表達于非肌肉細胞調節細胞結構和活力
,,。
注2肌動蛋白分子質量為具有高度保守性在細胞中的表達相對穩定因此它常被用作
:45ku±3ku(1u≈1Da),,,
校正系統的內參
。
32
.
肌動蛋白抗體actinantibody
以肌動蛋白為抗原免疫動物之后獲得的動物血清中能夠與肌動蛋白特異性抗原抗體結合的免
,“-”
疫球蛋白的總稱
。
4縮略語
下列縮略語適用于本文件
。
過硫酸銨
APS:(ammoniumperoxodisulphate)
二喹啉甲酸
BCA:(bicinchoninicacid)
化學發光試劑
ECL:(electrogeneratedchemiluminescence)
辣根過氧化物酶
HRP:(horseradishperoxidase)
乙基苯基聚乙二醇
NP-40:(NonidetP40)
磷酸鹽緩沖液
PBS:(phosphatebuffersaline)
磷酸鹽吐溫緩沖液
PBST:(phosphatebuffersalinew
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