動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體 高二下學(xué)期生物人教版（2019）選擇性必修3

動(dòng)物細(xì)胞工程2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)去壁去壁融合

再生新壁脫分化再分化移栽（1）植物細(xì)胞融合（2）植物組織培養(yǎng)回顧植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)紅色熒光染料標(biāo)記的膜蛋白綠色熒光染料標(biāo)記的膜蛋白37℃40min雜交細(xì)胞細(xì)胞融合人細(xì)胞小鼠細(xì)胞定義：使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)結(jié)果：融合后形成的雜交細(xì)胞具有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息。原理：細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)融合的常用方法：PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法（動(dòng)物特有）意義：突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能比較植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合優(yōu)化設(shè)計(jì)P53單克隆抗體及其應(yīng)用傳統(tǒng)獲得抗體的方法抗原

從動(dòng)物的血清中分離抗體動(dòng)物體內(nèi)缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，特異性差。B淋巴細(xì)胞（每個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體）克隆B淋巴細(xì)胞群產(chǎn)生化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)、靈敏度高的抗體單克隆抗體在體外培養(yǎng)條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞是不可能無(wú)限增殖的。基本思路單克隆抗體及其應(yīng)用一種B淋巴細(xì)胞（只產(chǎn)生一種特定抗體）能在體外大量增殖的骨髓瘤細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體大量增殖單克隆抗體既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體

由于發(fā)明了單克隆抗體的制備技術(shù)，米爾斯坦和科勒于1984年獲得了諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)過(guò)程單克隆抗體及其應(yīng)用注射特定的抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合（1）未融合的細(xì)胞（2）多種雜交細(xì)胞：①B-B細(xì)胞、②瘤-瘤細(xì)胞、③雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性第一次篩選：獲得雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體及其應(yīng)用思考

討論【資料】：已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。B淋巴細(xì)胞中這兩種DNA的合成途徑都有，但B淋巴細(xì)胞不能無(wú)限增殖。而鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒(méi)有S途徑，但它能不斷分裂增殖。學(xué)習(xí)任務(wù)：請(qǐng)根據(jù)以上信息，設(shè)計(jì)一種選擇培養(yǎng)基，篩選出雜交瘤細(xì)胞。淋巴細(xì)胞S途徑D途徑合成DNA不能無(wú)限增殖骨髓瘤細(xì)胞

D途徑合成DNA能無(wú)限增殖雜交細(xì)胞S途徑D途徑合成DNA能無(wú)限增殖提示：在基本培養(yǎng)液中加入氨基喋呤制成選擇培養(yǎng)基（HAT），將誘導(dǎo)融合后的細(xì)胞接種在該培養(yǎng)液中，能不斷分裂增殖的細(xì)胞即為雜交瘤細(xì)胞。單克隆抗體及其應(yīng)用思考

討論【資料】：小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經(jīng)選擇培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞，如何獲得只分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。原理：抗原——抗體特異性結(jié)合將雜交瘤細(xì)胞群稀釋?zhuān)s每孔1個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)（克隆化培養(yǎng)）一段時(shí)間后，檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔分泌抗體能跟特定抗原結(jié)合的細(xì)胞即為所需雜交瘤細(xì)胞抗體檢測(cè)單克隆抗體及其應(yīng)用

雜交瘤細(xì)胞抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞（能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞）克隆化培養(yǎng)、抗體檢測(cè)第二次篩選（可進(jìn)行多次）注射到小鼠腹腔內(nèi)體外培養(yǎng)獲取單克隆抗體從小鼠腹水中從細(xì)胞培養(yǎng)液中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞增殖第二次篩選：獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體篩選二雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)篩選一骨髓瘤細(xì)胞

誘導(dǎo)融合分泌特異抗體的雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞群提取已免疫的B淋巴細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)既能大量繁殖又能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備注射抗原單克隆抗體及其應(yīng)用01單克隆抗體的應(yīng)用作為診斷試劑02單克隆抗體的應(yīng)用用于運(yùn)載藥物或治療疾病討論：1.