DB12∕T 1359-2024 水產養殖用非規范藥品中喹諾酮類、磺胺類、酰胺醇類抗生素殘留量的測定液相色譜-質譜∕質譜法

ICS65.150

CCSB50

12

天津市地方標準

DB12/T1359—2024

水產養殖用非規范藥品中喹諾酮類、磺胺類、

酰胺醇類抗生素殘留的測定液相色譜-質

譜/質譜法

Determinationofquinolones,sulfonamidesandamidolantibioticresiduesin

non-standarddrugsforaquaculturebyliquidchromatography-tandemmass

spectrometry

2024-11-27發布2025-01-01實施

天津市市場監督管理委員會發布

DB12/T1359—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定

起草。

本文件由天津市農業農村委提出并歸口。

本文件起草單位：天津市農業生態環境監測與農產品質量檢測中心、山東省科學院海洋儀器儀表研

究所。

本文件主要起草人：陳永平、成振華、王輝、韓現芹、時文博、史艷艷、高麗娜、王愿寧、高麗、

李灝、曹建新、易偉、蘇夢寒。

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DB12/T1359—2024

水產養殖用非規范藥品中喹諾酮類、磺胺類、酰胺醇類抗生素殘留

的測定液相色譜-質譜/質譜法

1范圍

本文件規定了水產養殖用非規范藥品中喹諾酮類、磺胺類、酰胺醇類抗生素留量測定的原理、試劑

和材料、儀器、分析步驟、結果計算、正確度與精密度。

本文件適用于水產養殖用非規范藥品中諾氟沙星、環丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、培氟沙星、洛

美沙星、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基異噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺多辛、磺胺喹噁

啉、磺胺異噁唑、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考共17種抗生素殘留量檢測。

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T20195動物飼料試樣的制備

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

非規范藥品non-standarddrugs

水產養殖過程中用來凈化水質、改良地質、除雜等的非藥品，包括水質改良劑、底質改良劑、微生

態制劑、除雜劑及促生長劑等。

4原理

非規范藥品中喹諾酮類、磺胺類、酰胺醇類抗生素，先加水溶解或稀釋，再用酸化乙腈萃取，經固

相萃取柱凈化，液相色譜-質譜/質譜法檢測，內標法定量。

5試劑材料

除非另有說明，水為GB/T6682規定的一級水。

5.1試劑

5.1.1甲醇（CH3OH，CAS號：67-56-1）：色譜純。

5.1.2乙腈（CH3CN，CAS號：75-05-8）：色譜純。

5.1.3甲酸（HCOOH，CAS號：64-18-6）：色譜純。

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DB12/T1359—2024

5.1.4二氯甲烷（CH2Cl2，CAS號：75-09-2）：分析純。

5.1.5乙酸乙酯（C4H8O2，CAS號：141-78-6）：分析純。

5.1.6氯化鈉（NaCl，CAS號：7647-14-5）：分析純。

5.1.7乙酸銨（CH3COONH4，CAS號：631-61-8）：分析純。

5.2溶液配制

5.2.1乙酸銨（2.0mmoL/L）-甲酸溶液（0.1%）：稱取0.077g無水乙酸銨，用0.1%甲酸水溶液溶解

并稀釋至500mL。

5.2.2甲醇-水溶液（15+85，體積比）：量取甲醇15mL加入85mL水中，混勻。

5.2.3甲酸-乙腈（0.1+99.9，體積比）：量取甲酸0.5mL，加乙腈稀釋至500mL，混勻。

5.3標準品

17種抗生素類標準品應符合附錄A，純度≥95%。

5.4標準溶液配制

5.4.1標準貯備液

100μg/mL。取諾氟沙星、環丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、磺胺嘧啶、磺

胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基異噁唑、磺胺多辛、磺胺喹惡啉、磺胺異噁唑、氯

霉素、甲砜霉素、氟苯尼考各適量（相當于各活性成分10mg），精密稱定，于各自容量瓶中，喹諾酮

類需加0.2mL甲酸，均用甲醇溶解后并稀釋定容至100mL，配制成濃度為100μg/mL的標準儲備液。避

光-18℃以下保存，有效期1年。

5.4.2氘代同位素內標標準儲備液

500μg/mL。取氘代磺胺鄰二甲氧嘧啶、氘代磺胺間二甲氧嘧啶、氘代諾氟沙星、氘代環丙沙星、

氘代恩諾沙星、氘代氯霉素內標各適量（相當于各活性成分5mg），精密稱定，于各自容量瓶中，用甲

醇溶解稀釋定容至10mL。配制成濃度為500μg/mL同位素內標標準儲備液，避光-18℃以下保存，有

效期1年。

5.4.3喹諾酮類與磺胺類混合標準工作液

準確吸取各喹諾酮類和磺胺類標準儲備液（5.4.1）適量，用甲醇稀釋制成1.0μg/mL混合標準工

作液，避光4℃冷藏保存，有效期1個月。

5.4.4酰胺醇類混合標準工作液

準確吸取各酰胺醇類標準儲備液（5.4.1）適量，用甲醇稀釋制成氯霉素、氟苯尼考0.1μg/mL，

甲砜霉素0.5μg/mL混合標準工作液，避光4℃冷藏保存，有效期1個月。

5.4.5磺胺類與喹諾酮類混合內標標準工作液：

準確吸取各磺胺類和喹諾酮類內標標準儲備液（5.4.2）適量，用甲醇稀釋制成10.0μg/mL混合

標準工作液，避光4℃冷藏保存，有效期1個月。

5.4.6酰胺醇類混合內標標準工作液

準確吸取各酰胺醇類內標標準儲備液（5.4.2）適量，用甲醇稀釋制成1.0μg/mL混合內標標準工

作液，避光4℃冷藏保存，有效期1個月。

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DB12/T1359—2024

5.5材料

通過式固相萃取柱，200mg/6mL，或性能相當者。

6儀器

6.1液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧（ESI）離子源。

6.2分析天平：感量0.01g、0.01mg。

6.3高速離心機：轉速大于10000r/min。

6.4超聲波震蕩儀。

6.5渦旋振蕩器。

6.6氮吹儀。

6.7粉碎裝置：如杵或研缽。

6.8篩：篩孔為1mm金屬網。

7試樣制備

7.1試樣制備

7.1.1固態非規范藥品

按GB/T20195的規定制備試樣，至少100g，粉碎使其全部通過1.0mm孔徑的分析篩，裝入密閉容

器中備用。

7.1.2液態非規范藥品

將樣液過0.45μm濾膜，收集樣液體積20mL，于密閉容器中保存。

7.2試樣保存

將試樣于4℃及以下條件下保存。

8分析步驟

8.1樣品處理

稱取非規范藥品0.1g（準確至0.01g)，用水稀釋至100mL，渦旋1min，超聲波超聲5min，取5mL

置于50mL離心管中，加入50μL混合內標標準使用液（5.4.5、5.4.6），加入2.0gNaCl，再加入10mL

酸化乙腈，渦旋1min，超聲波超聲5min，8000r/min離心3min，取上清液過固相萃取柱于20mL玻璃

離心管中，再加入5mL酸化乙腈，重復上述操作，2mL乙腈淋洗固相萃取柱，合并收集液于40℃條件

下，氮氣吹至近干，殘留物加入甲醇溶液（5.2.2）1mL，充分渦旋混勻，轉移至1.5mL離心管中，20000

r/min離心5min，取上清液過0.2μm有機相濾膜后，取100μL濾液，用甲醇溶液（5.2.2）定容至10.0

mL，上機測定。

注：對在本實驗條件下測定濃度過高或過低時，應適當增加或降低稀釋倍數。

8.2測定

8.2.1磺胺類與喹諾酮類

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DB12/T1359—2024

8.2.1.1色譜條件

8.2.1.1.1色譜柱：C18色譜柱，1.7μm，100mm×2.1mm（內徑），或性能相當。

8.2.1.1.2柱溫：35℃。

8.2.1.1.3流速：0.25mL/min。

8.2.1.1.4進樣體積：5.0μL。

8.2.1.1.5流動相：甲醇-（乙酸銨-甲酸溶液，5.2.1）；洗脫程序見表1。

表1流動相梯度洗脫程序

時間（min）VA/%VB/%

11090

64060

6.19010

89010

8.11090

101090

8.2.1.2質譜條件

8.2.1.2.1離子化模式：電噴霧離子源（ESI+），多反應監測。

8.2.1.2.2噴霧電壓：5500v。

8.2.1.2.3氣簾氣壓力：0.24MPa。

8.2.1.2.4碰撞氣壓力：0.02MPa。

8.2.1.2.5離子源溫度：550℃。

8.2.1.2.6碰撞室入口電壓：10v。

8.2.1.2.7碰撞室出口電壓：10v。

8.2.1.2.8駐留時間：50ms。

8.2.1.2.9離子源Gas1：0.6MPa。

8.2.1.2.10離子源Gas2：0.2MPa。

8.2.1.2.11多反應監測母離子、子離子、解簇電壓和碰撞能量見表2。

表2多反應監測母離子、子離子、解簇電壓和碰撞能量

母離子子離子解簇電壓碰撞能量

目標化合物

m/zm/zvev

1088522

磺胺噻唑256

156*8516

1088525

磺胺嘧啶251

156*8516

1088522

磺胺甲基異噁唑254

156*8516

1868517

磺胺二甲嘧啶279

156*8519

1728517

磺胺甲基嘧啶265

156*8517

5

DB12/T1359—2024

1088529

磺胺多辛311

156*8519

1088529

磺胺喹噁啉301

156*8519

1088525

磺胺異噁唑268

156*8517

233.48526

諾氟沙星320.3

276.3*8526

245.38535

環丙沙星332.2

288.3*8525

245.2*9039

恩諾沙星360.2

316.39027

2618527

氧氟沙星362

318*8518

2908518

培氟沙星334

316*8520

2658522

洛美沙星352

308*8516

氘代諾氟沙星325.3307.28530

氘代環丙沙星340.3322.38529

氘代恩諾沙星365.3321.39428

氘代磺胺間二甲氧

3171568520

嘧啶

氘代磺胺鄰二甲氧

3141568517

嘧啶

注：*為定量碎片離子

8.2.1.3標準工作曲線

分別準確移取標準工作液適量，甲醇溶液（5.2.1）定容至1mL，喹諾酮類與磺胺類稀釋成質量濃

度為5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、200ng/mL，內標液濃度均為50ng/mL。

8.2.2酰胺醇類測定

8.2.2.1色譜條件

8.2.2.1.1色譜柱：C18色譜柱，1.7μm，100mm×2.1mm（內徑），或性能相當。

8.2.2.1.2柱溫：35℃。

8.2.2.1.3流動相：甲醇-水；流動相洗脫程序見表3。

8.2.2.1.4流速：0.3mL/min。

8.2.2.1.5進樣體積：5.0μL。

表3流動相梯度洗脫程序

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時間（min）VA/%VB%

11090

64060

6.19010

89010

8.11090

101090

8.2.2.2質譜條件

8.2.2.2.1離子化模式：電噴霧離子源（ESI-），多反應監測。

8.2.2.2.2噴霧電壓：-5500v。

8.2.2.2.3氣簾氣壓力：0.24MPa。

8.2.2.2.4碰撞氣壓力：0.02MPa。

8.2.2.2.5離子源溫度：550℃。

8.2.2.2.6碰撞室入口電壓：10v。

8.2.2.2.7碰撞室出口電壓：10v。

8.2.2.2.8駐留時間：100ms。

8.2.2.2.9離子源Gas1：0.6MPa。

8.2.2.2.10離子源Gas2：0.2MPa。

8.2.2.2.11多反應監測母離子、子離子、解簇電壓和碰撞能量見表4。

表4多反應監測母離子、子離子、解簇電壓和碰撞能量

母離子子離子解簇電壓碰撞能量

目標化合物

m/zm/zvev

152*-55-24

氯霉素321

257-55-18

290-55-18

甲砜霉素354

185*-55-27

185-55-14

氟苯尼考356

336*-55-27

氘代氯霉素334.1318.1*-55-26

注：*為定量碎片離子

8.2.2.3標準工作曲線

分別準確移取標準工作液適量，甲醇溶液（5.2.1）定容至1mL，氯霉素、氟苯尼考稀釋至0.5ng/mL、

1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL，甲砜霉素稀釋至2.5ng/mL、5.0ng/mL、

10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL，內標液濃度均為5.0ng/mL，供液相色譜-串聯質

譜儀測定。

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8.2.3定性和定量

8.2.3.1保留時間

被測試樣中目標物色譜峰的保留時間與相應標準色譜峰的保留時間相比較，相對誤差應在±2.5%之

內。

8.2.3.2離子豐度比

在相同實驗條件下進行樣品測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標準樣品相一致，同一檢測批

次，對同一化合物，樣品中目標化合物的離子豐度比與質量濃度相當的標準溶液相比，其允許相對偏差

不超過表5規定的范圍，則可判斷樣品中存在目標物。

表5定性時離子豐度比最大允許偏差

離子豐度比（%）＞50＞20～50＞10～20≤10

允許相對偏差(%)±20±25±30±50

8.2.3.3定量

內標法定量，其中磺胺異噁唑、磺胺喹噁啉、磺胺多辛以氘代磺胺間二甲氧嘧啶為內標，磺胺噻唑、

磺胺嘧啶、磺胺甲基異噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶以氘代磺胺鄰二甲氧嘧啶為內標，氯霉素、

甲砜霉素、氟苯尼考以氘代氯霉素為內標。在上述液相色譜-質譜條件下,標準溶液中特征離子質量色譜

圖見附錄B。

8.2.4試樣溶液測定

將標準工作液和試樣溶液依次注入液相色譜-質譜/質譜聯用儀中，保留時間和離子豐度比定性，測

得定量用子離子色譜峰面積，待測樣液中化合物的響應值應在儀器檢測的定量測定線性范圍之內。

8.2.5平行試驗

按以上步驟對同一試樣進行平行試驗測定。

8.2.6空白試驗

除不加試樣外，采用完全相同的測定步驟進行平行測定。

9結果計算

試樣中各藥物殘留量以質量分數ω計，單位為毫克每千克（mg/kg），按公式（1）或公式（2）計

算。

AAV1000

1i1

AsAism1000

V1000

22

m1000

式中：

——試樣中被測物殘留量的數值，單位為毫克每千克（mg/kg）；

8

DB12/T1359—2024

1——標準工作液中被測物的質量濃度數值，單位為毫克每升（mg/L）；

2——標準工作曲線中得到的試樣溶液中被測物的質量濃度數值，單位為毫克每升（mg/L）；

A——試樣溶液中被測物的質量色譜圖峰面積；

As——標準工作液中被測物的質量色譜圖峰面積；

Ai——試樣溶液中內標物的質量色譜圖峰面積；

Ais——標準工作液中內標物的質量色譜圖峰面積；

V——提取液體積的數值，單位為毫升（mL）；

m——試樣質量數值，單位為（g）.

計算結果以重復性條件下獲得的2次獨立測定結果的算術平均值表示，保留2位有效數字，含量超1

mg/kg時保留3位有效數字。

10正確度和精密度

10.1正確度

磺胺類、喹諾酮類、酰胺醇類測定回收率為70%～110%。

10.2精密度

本方法的批內相對標準偏差小于15%，批間相對標準偏差小于15%。

11其他

本實驗條件下非規范藥品中喹諾酮類、磺胺類定量限為1.0mg/kg；氯霉素、氟苯尼考定量限為0.1

mg/kg，氟苯尼考定量限為0.5mg/kg。

9

DB12/T1359—2024

A

A

附錄A

（規范性）

17種抗生素中英文對照索引

17種抗生素中英文對照索引，見表A.1。

表A.117種抗生素中英文對照索引

序號藥物中文名藥物英文名CAS號分子式

1諾氟沙星Norfloxacin70458-96-7C16H18FN3O3

2環丙沙星Ciprofloxacin85721-33-1C17H18FN3O3

3恩諾沙星Enrofloxacin93106-60-6C19H22FN3O3

4氧氟沙星Ofloxacin82419-36-1C18H20FN3O4

5培氟沙星Pefloxacin70458-92-3C17H20FN3O3

6洛美沙星Lomefloxacin98079-51-7C17H19F2N3O3

7磺胺噻唑Sulfathiazole72-14-0C9H9N3O2S2

8磺胺嘧啶Sulfadiazine68-35-9C10H10N4O2S

9磺胺甲基異噁唑Sulfamethoxazole723-46-6C10H11N3O3S

10磺胺二甲嘧啶Sulfam