NYT 765-2025 高致病性禽流感 樣品采集、保存及運輸技術規范標準立項發展報告

高致病性禽流感樣品采集、保存及運輸技術規范StandardizationDevelopmentReport:TechnicalSpecificationforCollection,PreservationandTransportationofHighlyPathogenicAvianInfluenzaSamples摘要高致病性禽流感（HighlyPathogenicAvianInfluenza,HPAI）是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一種烈性禽類傳染病，被世界動物衛生組織（WOAH）列為須通報動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。樣品采集、保存及運輸作為疫病監測、診斷和防控的首要環節，其規范化程度直接影響檢測結果的準確性和疫情防控的時效性。隨著我國禽類養殖規模化、集約化程度不斷提高，以及禽流感病毒變異株不斷出現，對樣品全流程管理的技術要求日益嚴格。在此背景下，農業農村部于2025年1月9日發布NY/T765-2025《高致病性禽流感樣品采集、保存及運輸技術規范》，并于2025年5月1日正式實施。本報告對該標準的立項背景、編制依據、主要技術內容及其創新點進行系統闡述，分析其對我國禽流感防控工作的重要支撐作用，并對標準的推廣應用前景進行展望。該標準的實施將對規范禽流感樣品管理流程、提升病原學檢測準確性、保障生物安全具有重要的指導意義。關鍵詞：高致病性禽流感；樣品采集；樣品保存；樣品運輸；技術規范；動物疫病防控；生物安全；行業標準Keywords:HighlyPathogenicAvianInfluenza;SampleCollection;SamplePreservation;SampleTransportation;TechnicalSpecification;AnimalDiseasePreventionandControl;Biosafety;IndustrialStandard一、引言1.1標準立項背景高致病性禽流感（HPAI）嚴重危害家禽養殖業健康發展，并對公共衛生安全構成潛在威脅。自2003年以來，H5N1亞型高致病性禽流感病毒在全球范圍內廣泛傳播，我國也多次暴發大規模疫情，造成重大經濟損失。近年來，H5N6、H5N8及H7N9等亞型病毒不斷出現和重組變異，疫情形勢日趨復雜。據農業農村部通報數據，2020至2024年間，我國仍有多省份報告高致病性禽流感疫情，疫病防控壓力持續存在。在禽流感防控工作中，實驗室檢測是疫情確診、病毒監測和防控效果評估的核心技術手段，而檢測結果的準確性與樣品的采集質量、保存條件和運輸環節密切相關。不規范的操作可能導致樣品降解、污染或病原滅活，進而造成假陰性結果，延誤疫情處置時機。2004年頒布的NY/T765-2004《高致病性禽流感樣品采集、保存及運輸技術規范》在近二十年的防控工作中發揮了重要作用，但已難以適應當前疫病防控形勢和技術發展的需要。1.2標準修訂的必要性第一，病原變異對檢測技術提出新要求。近年來，高致病性禽流感病毒變異加快，不同亞型、不同譜系病毒并存，對樣品采集的類型、部位和檢測方法的適用性提出了更高要求。同時，分子生物學檢測技術（如實時熒光RT-PCR、基因測序等）的廣泛應用，對樣品采集和保存方式提出了新的技術要求。第二，生物安全法規體系日趨完善。2021年修訂實施的《中華人民共和國動物防疫法》明確強化了生物安全管理要求，2021年國務院發布《生物安全法》實施，對動物病原微生物的采集、保存和運輸提出了更為嚴格的規范。2004年版標準在生物安全方面的要求已明顯滯后于現行法規的要求。第三，行業管理和追溯體系發展需求。當前動物疫病防控信息化、可追溯管理已成為行業發展方向，樣品編號、信息記錄和追溯體系等需要在標準中予以規范。第四，標準有效期到期。根據《標準化法》相關規定，行業標準一般不超過五年需進行復審修訂，NY/T765-2004已嚴重超期，亟需全面修訂。1.3編制過程概況本標準的修訂工作由全國動物防疫標準化技術委員會歸口管理，主要起草單位包括中國動物衛生與流行病學中心、中國動物疫病預防控制中心等單位。編制工作自2023年啟動，歷經預研論證、立項評審、草案起草、征求意見、專家審定等階段，于2024年底完成報批稿，經農業農村部批準于2025年1月9日正式發布。二、編制依據與原則2.1法律法規依據本標準編制嚴格遵循以下法律法規和規范性文件要求：-《中華人民共和國動物防疫法》（2021年修訂）-《中華人民共和國生物安全法》（2021年施行）-《重大動物疫情應急條例》（國務院令第450號）-《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（國務院令第424號）-《高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運輸包裝規范》（農業部公告第503號）-《動物檢疫管理辦法》（農業農村部令2022年第3號）2.2主要參考標準本標準在修訂過程中充分參考了國內外相關標準和文獻，包括但不限于：-GB19489-2008《實驗室生物安全通用要求》-GB/T19495-2004《轉基因產品檢測核酸定性PCR檢測方法》（相關樣品處理要求）-GB/T6682-2008《分析實驗室用水規格和試驗方法》（涉及保存液配制用水要求）-NY/T541-2016《動物疫病實驗室檢驗樣品采集、保存和運輸技術規范》-GB/T38597-2020《生物樣品采集、保存和運輸通用要求》-《世界動物衛生組織（WOAH）陸生動物診斷試驗與疫苗手冊》（第29版，2021年）-WHO手冊《禽流感病毒標本采集、保存和運輸指南》-國際航空運輸協會（IATA）《危險品規則》（DGR）中關于感染性物質運輸的相關要求2.3修訂原則本標準修訂過程中堅持以下主要原則：（一）科學性原則。以禽流感病毒生物學特性和流行病學規律為基礎，結合實驗室檢測技術發展和實際工作需要，確保各項技術指標的先進性和科學性。（二）實用性原則。充分考慮基層防疫人員和實驗室檢測人員的實際操作條件和技術水平，規定的操作方法和流程應簡便易行，具有較強的可操作性。（三）協調性原則。與現行法律法規、上級標準及相關標準保持協調一致，確保標準體系的統一性和完整性，避免技術指標和要求的沖突。（四）安全性原則。強化生物安全要求，確保樣品采集、保存和運輸各環節的人員安全、環境安全和病原體可控。三、標準主要技術內容本章節重點介紹本次修訂中調整和新增的核心技術內容。3.1樣品采集技術規范3.1.1采樣人員要求3.1.2采樣時機與對象對不同類型樣品采集的時機和對象進行了科學界定。活禽樣品的采集應選擇在發病急性期進行，此時病毒滴度較高，有利于病原檢測。病死禽樣品的采集應在死亡后6小時內盡早完成，超過24小時的尸體組織通常已自溶腐敗，病毒核酸降解嚴重，不建議作為檢測樣品。靶動物樣品的選擇包括：-喉頭/泄殖腔拭子：適用于活禽感染狀態監測。-氣管/肺臟組織：適用于死亡禽只的病原學診斷。-血清樣品：適用于血清學監測和免疫效果評價（僅用于抗體檢測，不用于病原分離）。-環境樣品：包括糞便、飼料、飲水、籠具表面拭子等，適用于養殖環境病原污染監測。值得注意的是，修訂后的標準對不同亞型病毒的采樣策略進行了區分和明確。對于H5亞型病毒感染，由于病毒對呼吸系統的嗜性增強，上呼吸道拭子的檢出率顯著高于泄殖腔拭子，因此標準強化了咽喉部采樣在H5亞型監測中的權重和優先性；而對于H7亞型病毒，消化道排毒在早期感染中更為突出，泄殖腔拭子的診斷價值更為顯著。標準針對不同亞型的生物學特性，對各采樣部位的優先級和組合策略作出了更為科學的差異化規定。3.1.3采樣方法與技術要求針對不同類型的樣品，標準詳細規定了具體的采樣操作方法、采樣量、采樣部位和無菌操作要求。例如，喉頭拭子的采集應使用無菌棉拭子深入喉頭部位旋轉擦拭后放入含病毒保存液的采樣管中；組織樣品的采集應在無菌條件下切取病變與正常組織交界處組織塊等。主要技術進展：與舊版標準相比，修訂版在采樣技術方法上有以下顯著調整和更新：（1）采樣拭子材質要求的升級。明確了合成纖維拭子（如聚酯、人造絲等）應優先于棉拭子使用，因為棉花纖維中的脂肪酸成分可能對病毒產生滅活作用，且棉纖維對病毒粒子的吸附性較強、洗脫率低，可能影響后續檢測靈敏度；（2）病毒保存液配方的優化。推薦使用含蛋白穩定劑（如牛血清白蛋白或明膠）和抗生素的Hank‘s平衡鹽溶液或磷酸鹽緩沖液作為病毒保存液，同時對抗生素的具體配方和濃度進行了明確規定，以有效抑制細菌和真菌生長，防止樣品腐敗變質；（3）不同樣品類型采樣量的精準化。針對不同檢測目的（病毒分離、抗原檢測、分子生物學檢測）分別規定了適宜的樣品量范圍，對于熒光定量RT-PCR等分子檢測方法，要求每管拭子樣品保存液量不低于1mL，組織樣品每份不少于0.5g，血清樣品不少于0.5mL，以滿足檢測方法對樣品量的最低需求。（4）新增基因測序樣品的采集要求。針對目前病毒變異監測和溯源調查的需求，標準新增了對基因測序樣品的采集要求，要求采樣時應使用無核酸酶的采樣管和保存液，避免外源核酸污染，確保樣品適用于高通量測序分析。3.2樣品保存技術規范3.2.1保存溫度與時限根據樣品類型和預期保存時間，標準規定了分級保存條件：|樣品類型|短期保存（≤48h）|中期保存（3-7天）|長期保存（＞7天）||---------|-----------------|-----------------|-----------------||拭子樣品|2-8℃冷藏|-20℃冷凍|-70℃以下（或液氮）||組織樣品|2-8℃冷藏|-20℃冷凍|-70℃以下（或液氮）||血清樣品|2-8℃冷藏|-20℃冷凍|-20℃以下（避免反復凍融）||環境樣品|2-8℃冷藏|-20℃冷凍|-70℃以下|標準特別強調，用于病毒分離的樣品嚴禁反復凍融，凍融次數不應超過兩次。對于疑似含有高致病性禽流感病毒的組織樣品，應在采集后30分鐘內放入預冷的保存液或轉運培養基中，并盡快降溫至規定溫度。3.2.2保存液與保存管要求規定了病毒保存液和樣品保存管的統一要求。病毒保存液應具有維持病毒活性、抑制細菌和真菌生長、防止樣品降解的功能。常用保存液包括Hank‘s平衡鹽溶液、磷酸鹽緩沖液等，使用前應經過滅菌處理并添加適量抗生素（青霉素、鏈霉素、兩性霉素B等）。保存管應選用無菌、密封性能良好、耐低溫的專用采樣管（如凍存管），管壁應標注清晰耐久的標識信息。3.3樣品包裝與運輸技術規范3.3.1包裝要求標準對高致病性禽流感樣品的運輸包裝進行了嚴格規定，采用UN3373生物物質B類或UN2814感染性物質A類三層包裝系統（主容器、次級容器、外層包裝）：-主容器：密封防漏的樣品管或樣品袋，容積不超過1L（液體）或不超過外包裝容積的十分之一。-次級容器：堅固、防漏的第二層容器，內裝足量吸附材料，確保意外泄漏時液體被完全吸附。-外層包裝：具有足夠強度的外層包裝，尺寸不小于100mm×100mm，表面標注生物危害標識、樣品信息和應急聯系方式。3.3.2運輸條件與管理要求明確規定了不同運輸方式的溫度控制要求和管理規定。航空運輸須遵守IATA《危險品規則》中關于感染性物質的運輸規定，公路運輸應配備相應的溫控設備。樣品運輸時應隨附詳細的樣品清單、送檢單和生物安全說明，運輸人員應經過生物安全培訓。標準還要求運輸過程應建立全程溫度監控記錄，確保樣品在規定的溫度范圍內運輸。3.4樣品信息記錄與追溯修訂后的標準新增了樣品信息記錄與追溯管理的相關內容。要求建立完整的樣品信息記錄系統，包括：樣品編號（采用全國統一的編碼規則）、采樣信息（采樣地點、時間、動物種類、日齡、品種）、養殖場信息（場名、地址、聯系人）、臨床信息（癥狀、發病數、死亡數、免疫史）以及樣品流轉的全過程記錄。該條款旨在配合國家動物疫病追溯體系建設，實現樣品從采集到檢測結果報告的全鏈條可追溯。這一新增要求對于提升疫情處置效率、實現精準防控具有重要的技術支撐作用。3.5生物安全要求標準全面強化了各環節的生物安全管控要求，明確了樣品采集過程中的個人防護裝備（PPE）規范、操作場所的消毒要求以及樣品保存和運輸環節的安全管理措施。其中，新增強調了樣品采集過程中個人防護裝備（PPE）的穿戴規范，要求采樣人員應配備N95或以上級別防護口罩、一次性防護服、雙層手套、防護眼罩/面罩和鞋套，并按照標準程序進行穿戴和脫卸。同時要求參與樣品處理和運輸操作的人員應接受生物安全專項培訓，具備相應的生物安全意識和應急處置能力。四、主要起草單位簡介本標準的主要起草單位為中國動物衛生與流行病學中心（以下簡稱“中心”）。中國動物衛生與流行病學中心是農業農村部直屬的事業單位，掛中國動物衛生與流行病學中心、國家動物流行病學研究中心、國家動物衛生信息中心、國家動物衛生標準中心、國家動物生物安全三級實驗室和世界動物衛生組織（WOAH）中國代表處等機構牌子，承擔著全國重大動物疫病的監測、診斷、流行病學調查和研究工作，是我國動物疫病防控技術支撐體系的核心力量。中心設有國家禽流感參考實驗室，該實驗室是WOAH認可的禽流感參考實驗室，同時也是聯合國糧農組織（FAO）禽流感參考中心。實驗室擁有國家動物生物安全三級（BSL-3）實驗室，具備從事高致病性禽流感病毒分離鑒定、基因分析、抗原性研究和疫苗免疫效果評價的能力。實驗室長期承擔全國禽流感疫情診斷和監測任務，積累了豐富的樣品采集、處理和檢測經驗，為本標準的修訂提供了扎實的技術支撐。中心還是全國動物防疫標準化技術委員會秘書處掛靠單位，牽頭組織制修訂了大量動物防疫領域的國家標準和行業標準。在禽流感防控領域，中心先后主持完成了多項國家和行業標準的制修訂工作，包括禽流感診斷技術、禽流感疫情監測技術規范、禽流感滅活疫苗生產與檢驗技術等配套標準，形成了較為完善的禽流感防控標準體系。在本標準的修訂過程中，中心組建了由病毒學、流行病學、實驗室檢測和標準化管理等領域專家組成的編制組，系統梳理了我國禽流感防控工作對樣品管理的技術需求，廣泛征求了各級動物疫病預防控制機構、科研院所和高校專家的意見，確保了標準的技術先進性和行業適用性。五、標準實施意義與應用展望5.1標準實施的現實意義NY/T765-2025的發布實施具有重要的現實意義。在技術層面，該標準為高致病性禽流感樣品全流程管理提供了科學規范的技術依據。通過對采樣時機、采樣方法、保存條件和運輸要求的精細化規定，有效減少因樣品質量問題導致的假陰性或檢測失敗，提升疫情確診的準確性和時效性。在管理層面，標準新增的樣品信息記錄和追溯管理要求與我國正在推進的動物疫病追溯體系建設相銜接，有助于實現疫情監測數據的規范化采集和高效利用，提升重大動物疫病防控的精準化管理水平。在生物安全層面，標準強化了各環節的生物安全管控措施，從源頭降低病原體泄漏和擴散的風險，對保障養殖業生產安全、公共衛生安全和從業人員健康安全具有重要意義。5.2應用