GB 5009.210-2016 食品安全國家標準 食品中泛酸的測定.pdf

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 食品安全國家標準 食品中泛酸的測定 2 0 1 6 - 0 8 - 3 1發布2 0 1 6 - 0 9 - 2 0實施 中華人民共和國 國家衛生和計劃生育委員會 發 布 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 前 言 本標準代替G B/T5 0 0 9.2 1 02 0 0 8 食品中泛酸的測定 。 本標準與G B/T5 0 0 9. 2 1 02 0 0 8相比, 主要變化如下: 標準名稱修改為“ 食品安全國家標準 食品中泛酸的測定” ; 增加了高效液相色譜方法; 修改了食品的前處理方法; 增加了檢出限和定量限。 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 1 食品安全國家標準 食品中泛酸的測定 1 范圍 本標準規定了食品中泛酸和泛酸鈣的測定方法。 本標準第一法適用于食品中泛酸的測定, 第二法適用于營養素補充劑類保健食品和配方食品中泛 酸( 鈣) 的測定。 第一法 微生物法 2 原理 泛酸是植物乳桿菌L a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m(AT C C8 0 1 4) 生長所必需的營養素, 在一定控制條件 下, 將植物乳桿菌液接種至含有試樣液的培養液中, 培養一定時間后測定透光率( 或吸光度值) , 根據泛 酸含量與透光率( 或吸光度值) 的標準曲線計算出試樣中泛酸的含量。 3 試劑和材料 除非另有說明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規定的二級水。 3.1 試劑 3.1.1 鹽酸(HC l) 。 3.1.2 冰乙酸(C2H4O2) 。 3.1.3 氫氧化鈉(N a OH) 。 3.1.4 氯化鈉(N a C l) 。 3.1.5 碳酸鈉(N a2C O3) 。 3.1.6 碳酸氫鉀(KHC O3) 。 3.1.7 磷酸氫二鉀(K2H P O4) 。 3.1.8 三水合乙酸鈉(C2H3O2N a3 H2O) 。 3.1.9 三水合磷酸二氫鉀(KH2P O43 H2O) 。 3.1.1 0 七水合硫酸鎂(M g S O47 H2O) 。 3.1.1 1 七水合硫酸亞鐵(F e S O47 H2O) 。 3.1.1 2 一水合硫酸錳(M n S O4H2O) 。 3.1.1 3 三羥甲基氨基甲烷(C4H1 1NO3) 。 3.1.1 4 葡萄糖(C6H1 2O6) 。 3.1.1 5 甲苯(C7H8) 。 3.1.1 6 無水乙醇(C2H6O) 。 3.1.1 7 陰離子交換樹脂D o w e x18: 粒度3 8m 7 5m。 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 2 3.1.1 8 堿性磷酸酶: 酶活力2 3U/g。 3.1.1 9 鴿子肝臟丙酮提取物干粉(l i v e ra c e t o n ep o w d e r,f r o mp i g e o n) : 酶活力0.1U/g。 3.1.2 0 蛋白胨: 含氮量1 0%。 3.1.2 1 酵母提取物: 含氮量1 0%。 3.1.2 2 瓊脂。 3.2 試劑配制 3.2.1 乙酸溶液(0.2m o l /L) : 吸取1 1. 8m L冰乙酸, 用水稀釋至10 0 0m L, 混勻。 3.2.2 乙酸鈉溶液(0.2m o l /L) : 稱取2 7. 2g三水合乙酸鈉, 加水溶解并稀釋至10 0 0m L , 混勻。 3.2.3 鹽酸溶液(1m o l /L) : 吸取8 3m L鹽酸, 加水稀釋至10 0 0m L, 混勻。 3.2.4 鹽酸浸泡液: 吸取1 0 0m L鹽酸與5 0倍水混合。 3.2.5 氫氧化鈉溶液(1m o l /L) : 稱取4 0g氫氧化鈉, 加水溶解并稀釋至10 0 0m L, 混勻。 3.2.6 氫氧化鈉溶液(0.1m o l /L) : 稱取4g氫氧化鈉, 加水溶解并稀釋至10 0 0m L, 混勻。 3.2.7 T r i s緩沖液: 稱取1 2 1.0g三羥甲基氨基甲烷溶于5 0 0m L水中, 用冰乙酸調 p H 至8. 10.1, 加 水至10 0 0m L, 混勻。貯存于24冰箱中, 可保存2周。 3.2.8 生理鹽水: 稱取9g氯化鈉, 加水溶解并稀釋至10 0 0m L, 混勻。臨用前預先滅菌, 于1 2 1高 壓滅菌1 0m i n后備用。 3.2.9 乙醇溶液(2 0%) : 量取2 0 0m L無水乙醇與8 0 0m L水混勻。 3.2.1 0 碳酸鈉溶液(0.0 8m o l /L) : 稱取8. 5g碳酸鈉, 加水溶解并稀釋至10 0 0m L , 混勻。 3.2.1 1 碳酸氫鉀溶液(0.0 2m o l /L) : 稱取2g碳酸氫鉀, 加水溶解并稀釋至10 0 0m L。混勻。 3.2.1 2 堿性磷酸酶溶液: 稱取2g堿性磷酸酶, 加水溶解并稀釋至1 0 0m L。臨用現配,24冰箱 預冷。 3.2.1 3 鴿子肝臟提取液 3.2.1 3.1 活化D o w e x18: 稱取1 0 0gD o w e x18于錐形瓶中, 加入1L鹽酸溶液, 置于振蕩器上充 分振搖1 0m i n, 用鋪有濾紙的布氏漏斗過濾。D o w e x18轉回錐形瓶, 再加入1L鹽酸溶液重復振搖、 過濾。D o w e x18加入1L水振搖1 0m i n, 過濾, 重復用水洗滌1 0次。逐滴加入 T r i s緩沖液調節 D o w e x18p H至8.00.1。24冰箱保存,2天內用完。 3.2.1 3.2 鴿子肝臟提取液: 配制此試劑前一天將所用容器放入24冰箱中冷藏過夜。稱取3 0g 鴿子肝臟丙酮提取物干粉, 放入研缽中, 冰浴條件下分兩次加入3 0 0m L碳酸氫鉀溶液研磨至勻漿, 轉 入具塞離心管中, 蓋好塞后充分振搖,-2 0冷凍1 0m i n后以30 0 0r/m i n離心5m i n, 將上清液轉至 5 0 0m L廣口瓶中。加1 5 0g活化D o w e x18, 放入冰浴中混勻5 m i n, 將混合液倒入離心管中, 30 0 0r/m i n離心5m i n。將上清液移入另一5 0 0m L預冷的廣口瓶中,-2 0冷凍1 0m i n, 再加1 5 0g 活化D o w e x18, 放入冰浴中混勻5m i n, 將混合液倒入離心管中,30 0 0r/m i n離心, 將上清液分裝于 具塞試管中( 每管大約3m L) ,-2 0冷凍保存。用前于24冰箱內化凍并保存至用時。 3.3 培養基 3.3.1 甲鹽溶液: 分別稱取2 5g磷酸氫二鉀和2 5g三水合磷酸二氫鉀, 加水溶解并稀釋至5 0 0m L, 混 勻。加入1m L甲苯, 24冰箱可保存1年。 3.3.2 乙鹽溶液: 分別稱取1 0g七水合硫酸鎂、0.5g氯化鈉、0.5g七水合硫酸亞鐵和0.5g一水合硫 酸錳, 加水溶解并稀釋至5 0 0m L。加5滴鹽酸, 24冰箱可保存1年。 3.3.3 瓊脂培養基: 按表1稱取或吸取各試劑, 加水至1 0 0m L, 混合, 沸水浴加熱至瓊脂完全溶化。趁 熱用1m o l/L鹽酸溶液和/或1m o l/L氫氧化鈉溶液調節 p H 至6. 80.1。盡快分裝, 根據試管內徑粗 細加入3m L5m L, 液面高度不得低于2c m。塞上棉塞, 1 2 1高壓滅菌1 5m i n。取出后試管直立放 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 3 置, 待冷卻后于冰箱內保存, 備用。 表1 菌種儲備用瓊脂培養基配制一覽表 試劑用量 葡萄糖 1.0g 蛋白胨 0.8g 酵母提取物干粉 0.2g 三水合乙酸鈉 1.7g 甲鹽溶液 0.2m L 乙鹽溶液 0.2m L 瓊脂 1.2g 3.3.4 泛酸測定用培養液: 可按附錄A配制泛酸測定用培養液。也可直接由試劑公司購買效力相當的 泛酸測定用培養基, 用前按說明書配制。 3.4 標準品 D -泛酸鈣(C1 8H3 2C a N2O1 0) : 純度9 9%。 3.5 標準溶液的配制 3.5.1 泛酸標準儲備溶液(4 0.0g/m L) : 精確稱取4 3.5m g預干燥至恒重的D -泛酸鈣, 加水溶解并轉 移至10 0 0m L容量瓶中, 加1 0m L乙酸溶液,1 0 0m L乙酸鈉溶液, 用水定容至刻度。儲存于棕色瓶 中, 加入3滴5滴甲苯, 于24冰箱中可保存2年。 3.5.2 泛酸標準中間液(1.0 0g/m L) : 準確吸取2 5.0m L泛酸標準儲備溶液置于10 0 0m L容量瓶中, 加入1 0m L乙酸溶液, 1 0 0m L乙酸鈉溶液, 用水定容至刻度。加入3滴5滴甲苯于24冰箱 中可保存1年。 3.5.3 泛酸標準工作溶液(2 0n g/m L) : 準確吸取2.0 0m L泛酸標準中間溶液置于1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度, 混勻。臨用前現配。 4 儀器和設備 4.1 天平: 感量0.1m g。 4.2 恒溫培養箱:3 71。 4.3 壓力蒸汽消毒器:1 2 1。 4.4 漩渦振蕩器。 4.5 離心機: 轉速30 0 0r/m i n。 4.6 接種針和接種環。 4.7 p H計: 精度0.0 1。 4.8 紫外-分光光度計。 4.9 超凈工作臺。 4.1 0 超聲振蕩器。 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 4 5 菌種的制備與保存 5.1 菌種 植物乳桿菌L a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m(AT C C8 0 1 4) 。 5.2 儲備菌種的制備 將菌種植物乳桿菌L a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m(AT C C8 0 1 4) 轉接至瓊脂培養基中, 在3 71恒 溫箱中培養2 0h2 4h, 連續傳種2次3次。取出后放入24冰箱作為儲備菌株保存。每月至 少傳代一次, 不宜超過2 5代。 試驗前將儲備菌株接種至瓊脂培養基中, 3 71恒溫培養箱中培養2 0h2 4h以活化菌株, 用于接種液的制備。 注:保存數周以上的儲備菌株, 不能立即用作接種液制備, 試驗前宜連續傳種2代3代以保證細菌活力。 5.3 接種液的制備 試驗前一天, 取2m L泛酸標準工作溶液和4m L泛酸測定用培養液混勻, 分裝于2支5m L離心 管中, 塞好棉塞, 于1 2 1高壓滅菌1 5m i n后即為種子培養液。冷卻后用接種環將活化的菌株轉種至 2支種子培養液中, 于3 71恒溫培養箱中培養2 0h2 4h。取出后30 0 0r/m i n離心1 0m i n, 棄 上清液, 無菌操作下用已預先滅菌的生理鹽水淋洗2次,30 0 0r/m i n離心1 0m i n, 棄上清液。再加入 3m L滅菌生理鹽水, 振蕩混勻, 制成接種液, 立即使用。 6 分析步驟 注:所有操作均需避光進行 6.1 試樣制備 谷薯類、 豆類、 乳粉等試樣需粉碎、 研磨、 過篩( 篩板孔徑0. 3mm0.5mm) ; 肉、 蛋、 堅果等用勻質 器制成食糜; 果蔬、 半固體食品等試樣需勻漿混勻; 液體試樣用前振搖混合。4冰箱可保存1周。 6.2 試樣提取 6.2.1 直接提取法 形態為顆粒、 粉末、 片劑、 液體的營養素補充劑或強化劑、 預混料, 添加了泛酸鈣的配方食品或保健 食品可采用直接提取法。 準確稱取適量試樣( m) , 固體試樣0.2g 2g; 液態試樣5g 1 0g, 精確至0.0 0 1g, 轉入1 0 0m L錐 形瓶中, 加入8 0m L乙醇溶液, 具塞, 超聲振搖提取4h以上至試樣完全溶解, 用水定容至1 0 0m L ( V1) 。 6.2.2 酶解法 一般谷薯類、 肉蛋乳類、 果蔬菌藻類、 豆及堅果類等食品試樣宜采用酶解提取法。 6.2.2.1 水解: 準確稱取適量試樣(m, 約含0.0 2m g0.2m g泛酸) , 精確至0.0 0 1g。一般谷薯類、 肉 類、 蛋類、 豆類及其制品稱取1g5g; 新鮮果蔬、 乳及其制品稱取5g1 0g。轉入至1 0 0m L錐形瓶 中, 加1 0m LT r i s緩沖液、 4 0m L水, 振蕩混勻。于1 2 1高壓條件下水解1 5m i n。冷卻至室溫, 轉移 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 5 至1 0 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度( V1) , 過濾。 6.2.2.2 酶解: 準確吸取適量試樣濾液(1.0m L1 0.0m L,V2) 至2 5m L具塞刻度試管底部, 補水至 1 0m L, 加5m LT r i s緩沖液。在冰浴條件下, 依次小心加入預冷的0.1m L碳酸氫鈉溶液、0.4m L堿性 磷酸酶溶液、 0.2m L鴿子肝臟提取液和0.4m L水。小心混勻試管, 避免混合物黏附于試管壁, 加1滴 甲苯, 3 71溫箱中溫育過夜(8h以上) 。加水至2 0m L, 用冰乙酸調節 p H 至4. 50.1, 加水定容 至2 5. 0m L(V3) , 過濾。調節 p H : 吸取適量的試樣酶解液( 2.0m L2 0.0m L,V4) 于2 5m L具塞刻度試 管中, 加水至2 0m L, 用0. 1m o l /L氫氧化鈉溶液調節 p H 至6. 80.1, 用水定容至2 5.0m L(V5) 。 另取一試管加入5m LT r i s緩沖液和1 0m L水, 同法加入碳酸氫鈉溶液、 堿性磷酸酶溶液、 鴿子肝 臟提取液酶液及溫育過夜, 并調節 p H 至6. 80.1, 用水定容至2 5.0m L作為酶空白液。 注:以谷物、 乳粉等為基質的配方食品如需計量基質本底泛酸含量, 可采用酶解法提取。 6.3 稀釋 根據試樣中泛酸含量用水對試樣提取液進行適當稀釋( F) , 使稀釋后試樣提取液中泛酸濃度約為 2 0n g /m L。 6.4 測定系列管制備 所用試管使用前洗刷干凈, 用水煮沸3 0m i n, 瀝干后放入鹽酸浸泡液中浸泡2h, 經1 7 0烘3h后 使用。 6.4.1 試樣和酶空白系列管 取4支試管, 分別加入1. 0m L、2.0m L、3.0m L、4.0m L試樣提取液(Vx) , 補水至5.0m L, 加入 5.0m L泛酸測定用培養液, 混勻。另取4支試管分別加入1.0m L、2.0m L、3.0m L、4.0m L酶空白液。 6.4.2 標準系列管 取試管分別加入泛酸標準工作溶液0. 0 0m L、0.5 0m L、1.0 0m L、1.5 0 m L、2.0 0m L、2.5 0 m L、 3.0 0m L、3.5 0m L、4.0 0m L、4.5 0m L、5.0 0m L于試管中, 補水至5.0m L, 相當于標準系列管中泛酸含 量為0n g、 1 0n g、2 0n g、3 0n g、 4 0n g、5 0n g、6 0n g、 7 0n g、8 0n g、9 0n g、 1 0 0n g泛酸, 再加入5. 0m L泛 酸測定用培養液, 混勻。為保證標準曲線的線性關系, 應制備2套3套標準系列管, 繪制標準曲線時, 以每個標準點的均值計算。 6.5 滅菌 將所有測定管塞好棉塞, 于1 2 1高壓滅菌1 5m i n。 6.6 接種和培養 待測定系列管冷卻至室溫后, 在無菌操作條件下向每支測定管滴加接種液5 0L。塞好棉塞, 置于 3 71恒溫培養箱中培養1 6h2 0h, 直至達到最大混濁度, 即再培養2h后透光率( 或吸光度值) 無明顯變化。另準備一支標準0管( 含0n g泛酸) 不接種作為0對照管。 6.7 測定 將培養好的標準系列管、 試樣和酶空白系列管用漩渦混勻器混勻。用厚度為1c m比色杯, 于 5 5 0n m處, 以未接種的0對照管調節透光率為1 0 0%( 或吸光度值為0) , 依次測定標準系列管、 試樣和 酶空白系列管的透光率( 或吸光度值) 。如果0對照管有明顯的細菌增長, 或者與0對照管相比, 標準0 管透光率在9 0%以下( 或吸光度值在0. 2以上) ; 或標準系列管透光率最大變化量4 0%( 或吸光度值變 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 6 化量0. 4) , 說明可能有雜菌或不明來源的泛酸混入, 需重做試驗。 注:泛酸測定適宜的光譜范圍5 4 0n m6 6 0n m。 6.8 分析結果表述 6.8.1 標準曲線: 以標準系列管泛酸含量為橫坐標, 每個標準點透光率( 或吸光度值) 均值為縱坐標, 繪 制標準曲線。 6.8.2 試樣結果計算: 從標準曲線查得試樣和酶空白系列管中泛酸的相應含量( x) , 如果每個試樣的 4支試樣系列管中有3支以上泛酸含量在1 0n g 8 0n g范圍內, 且按照式(1) 計算每毫升試樣稀釋液中 泛酸濃度( ) , 各管之間相對偏差小于1 5%, 則可繼續按式( 2) 或式(3)式(5) 進行結果計算, 否則需重 新取樣測定。 試樣稀釋液中泛酸濃度按式( 1) 計算: = x Vx (1) 式中: 試樣稀釋液中泛酸濃度, 單位為納克每毫升( n g /m L) ; x 從標準曲線上查得測定系列管中泛酸含量, 單位為納克( n g ) ; Vx 制備試樣系列管時吸取的試樣稀釋液體積, 單位為毫升(m L) 。 采用直接提取法的試樣中泛酸含量按式( 2) 計算: X= V1F m 1 0 0 1 0 6 (2) 式中: X 試樣中泛酸含量, 固態試樣單位為毫克每百克( m g /1 0 0g) , 液態試樣為毫克每百毫升 ( m g /1 0 0m L) ; 試樣稀釋液泛酸濃度平均值, 單位為納克每毫升( n g /m L) ; V1 試樣提取液的定容體積, 單位為毫升(m L) ; F 試樣提取液稀釋倍數; m 試樣質量, 單位為克( g) ; 1 0 0 1 0 6 換算系數。 采用酶解法的試樣中泛酸含量按式( 3)式(5) 計算: m0=02 5 (3) mx= V5V3F V4 (4) X= ( mx-m0)V1 mV2 1 0 0 1 0 6 (5) 式中: m0 酶空白液中泛酸含量, 單位為納克( n g ) ; 0 酶空白液中泛酸濃度平均值, 單位為納克每毫升( n g /m L) ; 2 5 酶空白液總體積, 單位為毫升(m L) ; mx 試樣酶解液中泛酸含量, 單位為納克( n g ) ; 試樣稀釋液泛酸濃度平均值, 單位為納克每毫升( n g /m L) ; V5 試樣調 p H 后的定容體積, 單位為毫升(m L) ; V3 試樣酶解液的定容體積, 單位為毫升(m L) ; G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 7 F 試樣提取液稀釋倍數; V4 試樣調 p H 時吸取的酶解液體積, 單位為毫升(m L) ; X 試樣中泛酸含量, 固態試樣單位為毫克每百克( m g /1 0 0g) , 液態試樣為毫克每百毫升 ( m g /1 0 0m L) ; V1 試樣水解液的定容體積, 單位為毫升(m L) ; m 試樣質量, 單位為克( g) ; V2 試樣酶解時吸取的水解液體積, 單位為毫升(m L) ; 1 0 0 1 0 6 換算系數。 結果如以泛酸鈣計量, 應乘以1. 0 8 7。 計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示, 結果保留三位有效數字。 7 精密度 一般食品在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的1 5%; 營養 素補充劑和強化食品在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值 的5%。 8 其他 一般食品稱樣量為5g時, 檢出限為0. 0 3m g /1 0 0g, 定量限為0. 0 6m g /1 0 0g。營養強化劑類保健 食品和配方食品稱樣量為2g時, 檢出限為0. 0 2 5m g /1 0 0g, 定量限0. 0 5m g /1 0 0g。 第二法 高效液相色譜法 9 原理 利用泛酸易溶于水, 在弱酸性至中性條件下( p H5.07.0) 穩定的理化性質, 試樣用熱水在超聲波 振蕩下提取, 經C 1 8反相色譜柱分離, 在紫外檢測器檢測2 0 0n m波長處檢測, 根據色譜峰的保留時間及 紫外光譜圖定性, 外標法定量, 計算試樣中泛酸含量。 1 0 試劑和材料 除非另有說明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規定的一級水。 1 0.1 試劑 1 0.1.1 鹽酸(HC l) 。 1 0.1.2 磷酸(H3P O4) 。 1 0.1.3 磷酸二氫鉀(KH2P O4) : 色譜純。 1 0.1.4 七水合硫酸鋅(Z n S O47 H2O) 。 1 0.1.5 乙腈(CH3C N) : 色譜純。 1 0.1.6 淀粉酶: 酶活力1.5U/ m g 。 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 8 1 0.2 試劑配制 1 0.2.1 鹽酸(0.1m o l /L) : 吸取8. 3m L鹽酸至10 0 0m L容量瓶中, 加水稀釋定容至刻度, 混勻。 1 0.2.2 硫酸鋅溶液(0.5m o l /L) : 稱取1 4. 4g七水合硫酸鋅, 加水溶解并定容至1 0 0m L 。 1 0.2.3 磷酸二氫鉀溶液(0.0 2m o l /L) : 稱取2. 7 2 2g磷酸二氫鉀, 加5 0 0m L水溶解, 用磷酸調節 p H 至3. 0, 用水定容至10 0 0m L, 用0.4 5m濾膜過濾。 1 0.3 泛酸標準溶液 注:D -泛酸鈣( C1 8H3 2C a N2O1 0) : 純度9 9%。 1 0.3.1 泛酸標準儲備溶液(1.0 0 0m g/m L) : 準確稱取泛酸鈣1.0 8 7g, 加水溶解并轉入10 0 0m L容量 瓶中, 定容至刻度, 混勻( 4冰箱中可保存5d) 。 1 0.3.2 泛酸標準中間溶液(1 0 0.0g/m L) : 準確吸取標準儲備溶液1 0.0m L于1 0 0m L容量瓶中, 加 水定容至刻度。臨用前配制。 1 0.3.3 泛酸標準工作溶液: 分別準確吸取泛酸標準中間液1.0m L,2.0m L,4.0m L,8.0m L,1 6.0m L, 3 2.0m L于1 0 0m L容量瓶中, 加水定容至刻度, 得到濃度分別為1.0g/m L,2.0g/m L,4.0g/m L, 8.0g/m L,1 6.0g/m L,3 2.0g/m L的泛酸標準工作溶液, 臨用前配制。 1 1 儀器和設備 1 1.1 天平: 感量0.1m g。 1 1.2 恒箱培養箱:5 55。 1 1.3 超聲波振蕩器。 1 1.4 p H計: 精度0.0 1。 1 1.5 高效液相色譜儀: 帶紫外檢測器或二極管陣列檢測器。 1 2 分析步驟 1 2.1 試樣制備 固態試樣粉碎并混合均勻; 碳酸飲料需超聲波去除二氧化碳, 其他液態試樣搖勻。 1 2.2 試樣測定液的制備 1 2.2.1 營養素補充劑類保健食品 準確稱取或量取適量試樣( m) , 精確至0.0 0 1g, 一般固體試樣0.2g 2g, 液態試樣1 0g 2 0g, 置 于5 0m L錐形瓶中, 加入約3 0m L4 05 0溫水超聲提取2 0m i n, 用水定容至刻度( V) 。轉入離心 管30 0 0r/m i n離心5m i n 1 0m i n, 取上清液過0. 4 5m濾膜, 濾液待上機測定。 1 2.2.2 配方食品 準確稱取適量試樣( m) , 精確至0.0 0 1g, 一般固態試樣約5g, 液態試樣約2 0g。置于1 0 0m L錐形 瓶中, 加入4 05 0溫水至3 0m L。如果試樣中含有淀粉, 加入淀粉酶0. 2g, 振搖混勻,蓋上瓶塞, 在5 55水浴條件下, 振搖酶解1 2 0m i n 2 4 0m i n。如果試樣不含淀粉, 直接超聲提取2 0m i n。 取出試樣液, 冷卻至室溫, 用0. 1m o l /L鹽酸調節 p H 至5. 00.1, 加入5m L0.5m o l /L硫酸鋅溶 液, 充分混合。轉入5 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度并充分混勻后, 轉入離心管30 0 0r/m i n離心 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 9 5m i n 1 0m i n, 取上清液過0.4 5m濾膜, 濾液待上機測定。 1 2.3 稀釋 必要時, 試樣測定液用水進行適當的稀釋( F) , 使試樣測定液中泛酸濃度在1g/m L3 2g/m L 范圍內。 1 2.4 參考液相色譜條件 1 2.4.1 色譜柱:O D S - C1 8( 粒徑5m,2 5 0mm4.6mm) 或具有同等性能的色譜柱。 1 2.4.2 柱溫:2 80.5。 1 2.4.3 紫外檢測器: 檢測波長:2 1 0n m。 1 2.4.4 流動相:0.0 2m o l /L磷酸二氫鉀溶液+乙腈=9 5+5。 1 2.4.5 流速:1.0m L/m i n。 1 2.4.6 進樣量:1 0L或2 0L。 1 2.5 測定 1 2.5.1 標準曲線測定 按照已經確立的色譜條件, 將泛酸標準工作液依次進行色譜分析( 標準色譜圖見附錄B) , 記錄標準 出峰時間、 色譜峰高( 或峰面積) 。以標準工作液濃度為橫坐標, 峰高( 或峰面積) 為縱坐標, 繪制標準 曲線。 1 2.5.2 試樣溶液的測定 取試樣測定液按照色譜條件進行色譜分析, 根據試樣峰高( 或峰面積) 從標準曲線中查得相應的泛 酸濃度( ) 。 1 3 分析結果的表述 試樣中泛酸的含量按式( 6) 計算: X= VF m 1 0 0 10 0 0 (6) 式中: X 試樣中泛酸含量, 固態試樣單位為毫克每百克( m g /1 0 0g) , 液態試樣為毫克每百毫升 ( m g /1 0 0 m L) ; 從標準曲線上查得試樣測定液中泛酸的濃度, 單位為微克每毫升( g /m L) ; V 試樣測定液總體積, 單位為毫升(m L) ; F 試樣測定液稀釋倍數; m 試樣質量, 單位為克( g) ; 1 0 0 10 0 0 換算系數。 結果如以泛酸鈣計量, 應乘以1. 0 8 7。 計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示, 結果保留三位有效數字。 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 1 0 1 4 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的5%。 1 5 其他 當稱樣量為5g時, 檢出限為0. 0 2 5m g /1 0 0g, 定量限為0. 0 8m g /1 0 0g。 G B5 0 0 9.2 1 02 0 1 6 1 1 附 錄 A 泛酸測定用培養液的配制方法 A.1 試劑 A.1.1 鹽酸(HC l) 。 A.1.2 氫氧化鈉(N a OH) 。 A.1.3 活性炭: 粒度為0.0 5mm 0.0 7 4mm。 A.1.4 甲苯(C7H8) 。 A.1.5 硫酸腺嘌呤(C1 0H1 0N1 0H2S O4) 。 A.1.6 鹽酸鳥嘌呤(C5H5N5O5HC l) A.1.7 尿嘧啶(C4H4N2O2) 。 A.1.8 L -胱氨酸(C6H1 2N2O4S2) 。 A.1.9 L -色氨酸或D L -色氨酸(C1 1H1 2N2O2) 。 A.1.1 0 核黃素(C1 7H2 0N4O6) 。 A.1.1 1 鹽酸硫胺素(C1 2H1 7C l N4O SHC l) 。 A.1.1 2 生物素(C1 0H1 6N2O3S) 。 A.1.1 3 乙酸(C2H4O2) 溶液:0.0 2m o l /L。 A.1.1 4 對氨基苯甲酸(C7H7NO2)。 A.1.1 5 尼克酸(C6H5NO2) 。 A.1.1 6 鹽酸吡哆醇(C8H1 1NO3HC l) 。 A.1.1 7 無水乙醇(C2H5OH) 。 A.1.1 8 乙醇溶液(1+3) 。 A.1.1 9 聚山梨酯- 8 0( 吐溫- 8 0) 。 A.1.2 0 無水葡萄糖(C6H1 2O6) 。 A.1.2 1 三水合乙酸鈉(C2H3O2N a3 H2O) 。 A.1.2 2 無維生素酪蛋白(v i t a m i nf r e ec a s e i n) 。 A.2 試劑配制 A.2.1 氫氧化鈉溶液(1 0m o l /L) : 稱取4 0g氫氧化鈉, 用1 0 0m L水溶解。 A.2.2 氫氧化鈉溶液(1m o l /L) : 稱取4g氫氧化鈉, 用1 0 0m L水溶解。 A.2.3 鹽酸溶液(3m o l /L) : 吸取2 5 0m L鹽酸, 用水稀釋至10 0 0m L, 混勻。 A.2.4 鹽酸溶液(1m o l /L) : 按3. 2.3配制。 A.2.5 酪蛋白液: 稱取5 0g無維生素酪蛋白于5 0 0m L燒杯中, 加2 0 0m L鹽酸溶液(3m o l /L) , 于 1 2 1高壓水解6h。將水解物轉移至蒸發皿內, 在沸水浴上蒸發至膏狀。加2