GB/T 18636-2002藍舌病診斷技術

ICS.11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T18636—2002藍舌病診斷技術Diagnostictechniquesforbluetongue2002-02-19發布2002-05-01實施中華人民共和國發布國家質量監督檢驗檢疫總局

GB/T18636-2002本標準根據我國近二十年對藍舌病診斷的研究成果和技術的發展，參考世界動物衛生組織WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeintentionaldesEpizootic(法）,OIE標準性文件《世界動物衛生組織推薦的診斷方法和生物制品標準手冊》2.1.9條“藍舌病"和澳大利亞動物疫病標準診斷方法"Bluetongue"一章而編寫的。本標準引用了GB/T18089—2000《微量中和試驗及病毒分離和鑒定方法》有關規定方法藍舌病是由庫蝶傳播、藍舌病病毒引起的侵害反鄉動物的嚴重傳染病。藍舌病病毒系呼腸孤病毒科環狀病毒屬B群成員。國際已知有24個血清型·在血清學上與環狀病毒屬相關病毒有交叉反應；該病毒主要引起綿羊發病和死亡，牛及其他反馬動物常為隱性感染，但可通過媒介昆蟲傳播本病。鑒于該病的診斷和檢疫技術復雜，因此應建立該病的綜合診斷技術標準,這是制定本標準的宗旨。本標準規定的方法·分別適用于病毒分離鑒定、病原檢測、病毒血清型鑒定和抗體檢測等不同需要本標準的附錄A、附錄B都是標準的附錄，附錄C是提示的附錄本標準由中華人民共和國農業部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口本標準起草單位：云南省熱帶亞熱帶動物病毒病重點實驗室、農業部動物檢疫所、天津動植物檢疫本標準主要起草人：張念祖、楊承諭、李志華、張富強、胡玉玲、張開禮、馬洪超、趙祥平、向文彬

中華人民共和國國家標準舌病診斷技術GB/T18636-2002藍Diagnostictechniquesforbluetongue1范圍本標準規定了藍舌病的診斷技術和程序本標準適用于藍舌病的診斷和檢疫。4.5、6章用于病毒分離鑒定和病原檢測,7、8章用于病毒的血清型鑒定.9、10章用于抗體檢測。引用標準下列標準所包括的條文·通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時.所示版本均為有效。所有標準都會被修訂·使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。（B/T18089—2000藍舌病微量血清中和試驗及病毒分離和鑒定方法3病毒分離和鑒定3.1器械和設備3.1.196孔組織培養板(平底，簡稱96孔板),單道微量加樣器（0.5～10,5L～10L.40L～200L.200L～1000L)及滴頭·八道連續加樣器(50KL.100L..150L.200L)及滴頭。3.1.24C、一20C、一80C冰箱，普通恒溫培養箱及二氧化碳培養箱。3.1.3雞旺開孔器.照蛋箱或雞旺用燈.組織搞碎器及擦鏡紙(高壓滅菌備用)3.1.4超聲波粉碎器，低速離心機,倒置顯微鏡及熒光顯微鏡。3.7試劑與材料3.2.1肝素抗凝血采血管3.2.2細胞：蚊子細胞(C6/36)、倉鼠腎細胞(BHK.)或非洲綠猴腎細胞(Vero)3.2.3細胞培養液及分散液(按常規配方配制)。3.2.4藍舌病單克降抗體(8A3B6、7D3A2）3.2.5藍舌病熒光抗體3.2.610~11日齡雞壓3.3病毒分離3.3.1樣品的采集和制備見GB/T18089—2000中8.1.3.3.2雞胚接種見GB/T18089-2000中8.2.3.3.3接種細胞3.3.3.1將擒碎的雞胚肝組織離心.2000r/min.10min.取上清液。為避免不必要的“盲傳”.先對待分離材料進行捕獲酶聯免疫吸附(ELISA)試驗(見第6章)將呈陽性的反應材料接種C6/36細胞，每份樣品接兩管(瓶).每管(瓶)接0.2mL。將接種細胞置于30C溫箱培養7d.3.3.3.2吹打接種的C6/36細胞.接種于BHK細胞，每份C6/36接種八管（瓶)BHK。.每管0.2mL.接種的BH