（高清版）DB44∕T 1013-2012 《水產品鮮度指標K值的測定》

水產品鮮度指標K值的測定2012-06-04發布2012-09-15實施本標準按照GB/T1.1-2009的規定進行起草。本標準附錄A為資料性附錄。本標準由廣東省海洋與漁業局提出。本標準由廣東省水產標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：中國水產科學研究院南海水產研究所。本標準主要起草人：黃卉、楊賢慶、岑劍偉、郝淑賢、鄧建朝。本標準規定水產品鮮度指標K值的檢測方法。下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法用高氯酸提取試樣中的三磷酸腺苷及其分解關聯物，用氫氧化鉀溶液調節pH,使高氯酸提取物沉4試劑除另有規定外，所有試劑均為分析純，試驗用水應符合GB/T6682一級水的標準。4.2標準物質：三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、單磷酸腺苷、肌苷酸、次黃嘌呤核苷、次黃嘌呤，純度≥4.310%高氯酸溶液(m/v):量取高氯酸34mL,用水稀釋至400mL。4.45%高氯酸溶液(m/v):量取高氯酸17mL,用水稀釋至400mL。4.55mol/L氫氧化鉀溶液：準確稱取氫氧化鉀280g,用水稀釋至1000mL。4.620mmol/L檸檬酸-40mmol/L三乙胺-0.1%冰乙酸(pH4.8):稱取3.84g無水檸檬酸、5.6mL三乙胺、1.0mL冰乙酸加水溶解定容至1L,0.22μm濾膜過濾。4.7標準儲備溶液(20mmol/L):準確稱取三磷酸腺苷標準品0.1102g、二磷酸腺苷標準品0.0854g、單磷酸腺苷標準品0.0735g、肌苷酸標準品0.0696g、次黃嘌呤核苷標準品0.0536g、次黃嘌呤標準品0.0272g,加水溶解后定容到10mL,-18℃保存。4.8標準工作溶液：吸取一定量的標準儲備溶液(4.7),加水配制成0.005mmol/L～1.000mmol/L標5.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。5.2分析天平：感量0.0001g。5.3天平：感量0.01g。25.5均質機。5.6冷凍離心機：轉速10000r/min。5.7酸度計。6.2色譜柱溫：40℃。6.3流速：1.0mL/min。6.4檢測波長：260nm。6.6流動相：A液：20mmol/L檸檬酸-40mmol/L三乙胺-0.1%冰乙酸(pH4.8);B液：甲醇，梯度洗時間，min06007操作方法魚類，取背部肌肉；蝦類，去頭去殼，取肉。將所取樣品用組織準確稱取4.0g均勻碎魚肉(或蝦肉),加入20mL預冷的10%高氯酸溶液，均質后以10000r/min4℃冷凍離心15min,取上清液。沉淀用5%高氯酸溶液20mL洗滌，離心取上清液，重復操作一次，合并上清液，用5mol/L氫氧化鉀溶液調節pH為6.8,靜置30min。離心，將上清液轉移到100mL將標準工作液和樣品提取液置于液相色譜儀進樣器中，按上述色譜條件進行色譜分析，記錄峰面積，響應值均應在儀器檢測的線性范圍之內，根據標準品的保留時間定性，外標法定量。標準色譜圖樣品中三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、單磷酸腺苷、肌苷酸、次黃嘌呤核苷、次黃嘌呤含量均采用下3K——樣品中計算得到的K值，單位為百分率(%);4(資料性附錄)三磷酸腺苷、二磷酸腺