T-NAIA 0375-2025 枸杞中6種鏈格孢霉毒素的測定 液相色譜-串聯質譜法

枸杞中6種鏈格孢霉毒素的測定寧夏化學分析測試協會發布IT/NAIA0375—2025本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》規定編寫。本文件由寧夏化學分析測試協會提出并歸口。本文件起草單位：寧夏回族自治區食品檢測研究院（國家市場監督管理總局重點實驗室（枸杞及葡萄酒質量安全））、寧夏化學分析測試協會。本文件主要起草人：馬桂娟、朱燕燕、馬雪梅、郭陽、李強、姚曉瑜、呂毅、吳明、張小飛。1T/NAIA0375—2025枸杞中6種鏈格孢霉毒素的測定液相色譜-串聯質譜法本文件規定了枸杞中6種鏈格孢霉毒素（交鏈孢酚（AOH）、格孢毒素-I（ATX-I）、鏈格孢酚單甲醚（AME）、番茄交鏈孢菌毒素（AAL）、交鏈孢烯（ALT）、騰毒素（TEN））的液相色譜-串聯質譜檢測方法。本文件適用于枸杞子和枸杞鮮果中6種鏈格孢霉毒素的測定。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和實驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。試樣用乙腈提取，經分散固相萃取凈化，液相色譜-串聯質譜儀測定，外標法定量。5試劑和材料本方法所用的試劑，除另有規定外，均為分析純，水為GB/T6682規定的一級水。5.1試劑5.1.1乙腈：色譜純。5.1.4氯化鈉：分析純。5.1.5N-丙基乙二胺（PSA）粉末：粒徑50μm。5.1.6十八烷基（C18）粉末：粒徑50μm。5.1.70.1%甲酸水溶液：取甲酸（5.1.3）1.0mL，用水定容到1000mL，混勻。5.1.80.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸（5.1.3）1.0mL，用乙腈定容到1000mL，混勻。5.2標準品6種鏈格孢霉毒素中文名稱、英文縮寫、CAS號、化學分子式和純度見附錄A。5.3標準溶液配制2T/NAIA0375—20255.3.1標準儲備液（1.0mg/mL）：分別準確稱取6種鏈格孢霉毒素10.00mg，用乙腈溶解并定容至10mL，于-18℃避光貯存，有效期6個月。5.3.2混合標準中間液（10.0μg/mL分別準確吸取6種鏈格孢霉毒素儲備液（5.3.1）各100μL，用乙腈定容至10mL，于-18℃避光貯存，有效期3個月。5.3.3標準工作液：用空白樣品基質溶液配制成濃度為0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL的標準工作溶液，臨用現配。6儀器和設備6.1液相色譜-串聯質譜儀：配備電噴霧離子源。6.2天平：感量0.01mg和0.01g。6.3高速粉碎機。6.4渦旋混合器。6.5超聲波發生器。6.6離心機：轉速不低于6000r/min。6.7濾膜：0.22μm，有機相，或相當者。樣品經高速粉碎機粉碎，于-18℃及以下條件保存。7.2提取和凈化枸杞鮮果：稱取10g樣品（精確至0.01g）于50.0mL離心管中，加入10.0mL乙腈（5.1.1）和（5.1.5）和50mgC18（5.1.6）的凈化管內，渦旋2min，6000r/min離心3min，上清液經0.22μm濾膜過濾（6.7），上機測定。枸杞子：稱取5g樣品（精確至0.01g）于50.0mL離心管中，加入5.0mL水，渦旋振蕩2min，靜置60min后，處理過程同枸杞鮮果。7.3儀器參考條件7.3.1液相色譜參考條件a）色譜柱：C18，2.1mm×100mm，粒徑1.7μm或性能相當。b）柱溫：30℃。c）流動相：A相為0.1%甲酸水溶液（5.1.7），B相為0.1%甲酸乙腈溶液（5.1.8），流動相梯度條d）流速：0.3mL/min。e）進樣量：10μL。3T/NAIA0375—2025表1流動相及梯度洗脫條件5557.3.2質譜參考條件a）離子源：電噴霧離子源（ESI）。b）掃描方式：正離子掃描和負離子掃描。c）檢測方式：多反應監測（MRM）。d）鞘氣溫度：350℃。e）鞘氣流速：12.0L/min。f）脫溶劑氣溫度：325℃。g）脫溶劑氣流速：8.0L/min。h）毛細管電壓：3500V（正模式），4000V（負模式）。i）定性離子對、定量離子對、碰撞能量等參數參見附錄B。7.4定性確證7.4.1保留時間被測物質色譜峰保留時間與標準物質色譜峰保留時間相比較，相對誤差應在±2.5%以內。7.4.2離子豐度比相同實驗條件下進行樣品測定時，如果檢出色譜峰的保留時間與標準品一致，并且在扣除背景后的樣品質譜圖中，所選擇的離子均出現。而且樣品化合物的離子豐度比與質量濃度相當的標準溶液相比，相似度的允許偏差不超過表2規定的范圍，則可判定樣品中存在目標組分。表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差>50%>20%至50%>10%至20%7.5定量測定將基質標準溶液與試液依次注入液相色譜-串聯質譜儀中，采用基質標準溶液校準曲線外標法定量，待測試液中目標物的響應值均應在儀器檢測的定量線性范圍內，超過線性范圍時應進行適當倍數稀釋后再進行分析。6種鏈格孢霉毒素的定量離子對典型色譜圖參見附錄C。7.6空白試驗除不加試樣外，均按上述步驟進行。4T/NAIA0375—20258結果計算試樣中6種鏈格孢霉毒素的含量按式（1）進行計算：X——試樣中各化合物含量，單位為微克每千克(μg/kg）；C——由標準曲線計算出的試樣溶液濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V——提取液體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質量，單位為克（g）。注：測定結果用平行測定的算術平均值表示，保留三位有效數字。9精密度在重復性測定條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。交鏈孢酚（AOH）、格孢毒素-I（ATX-I）、鏈格孢酚單甲醚（AME）、番茄交鏈孢菌毒素（AAL）、交鏈孢烯（ALT）、騰毒素（TEN）的定量限均為1.5μg/kg。5T/NAIA0375—20256種鏈格孢霉毒素中文名稱、英文縮寫、CAS號、化學分子式和純度表A.16種鏈格孢霉