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DB34DB34/T1891—2013活毒疫苗中禽白血病病毒污染檢測技術規程DiagnosticTechnologySpecificationonAvianLeukosisVirusContaminationofLiveAttenuatedVaccine安徽省質量技術監督局發布I雞白血病是由反轉錄病毒科禽反轉錄病毒屬的禽白血病病毒（ALV）引起的雞的傳染性腫瘤疾病，重，活毒疫苗的污染是引起傳播的重要因素，檢測活毒疫苗中ALV的污染對防控雞白血病具有重要意1NY/T680-2003禽白血病病毒p27抗原酶聯免疫吸附試驗方法50羽份。取100ul稀釋液進行ELI4檢測方法4.1酶聯免疫吸附試驗（ELISA按NY/T680-2003的要求進行，試驗成立條件略注：也可選擇市售商品化p27抗原ELTaq酶、dNTP、DNAMarker、瓊脂糖、細胞裂解液、酚、氯仿、異戊醇、ddH2O、7），2c)加入等體積酚、氯仿、異戊醇（25:24:1),室溫振蕩5min，靜置5min。4℃,12000rpm離分鐘，讓乙醇揮發干凈。加入20～302211DNA模版2注：根據禽白血病病毒各亞群pol基因序列相對保守的特點，在其保守區內設計15’-CTAACGAGGCGAGGGAATG-3’，下游5’-TTGGTGGGTTGGGTGGAGA-3’，擴增泳液直至淹沒凝膠。取6μL～8μLPCR擴增產物與1μL～2μ3電泳結束后，取出凝膠板置于紫外透射儀上打開紫外燈觀察。陽性對照在214bp處有明顯的目的條帶，而陰性對照無任何條帶則實驗成立。若被檢樣品在214b陰性，見圖1。bp250圖1禽白血病病毒(ALV)P27抗原PCR陽性參考圖4稱取1MTris溶液160ml用A.6細胞裂解液的配制A.750×TAE緩沖液（貯存液）配制Tris堿242g，冰醋酸57.0mL，0.5mol/LEDTA(pH8.0)100mL攪拌溶解后，用NaOH調pH至8.3，加去離子水定容至1000mL，常溫保持備用

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