2026年大腸桿菌檢測試題及答案

2026年大腸桿菌檢測試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.下列關于大腸桿菌生物學特性的描述，錯誤的是（）A.革蘭氏陰性桿菌B.兼性厭氧C.能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣D.氧化酶試驗陽性2.按照GB4789.38-2012《食品安全國家標準食品微生物學檢驗大腸桿菌計數(shù)》，檢測固體樣品時，前處理需稱取（）樣品加入無菌稀釋液。A.5gB.10gC.25gD.50g3.使用伊紅美藍瓊脂（EMB）分離大腸桿菌時，典型菌落的特征是（）A.無色透明，邊緣整齊B.黑色帶金屬光澤，表面濕潤C.粉紅色，有沉淀環(huán)D.紫黑色，有綠色金屬光澤4.下列培養(yǎng)基中，屬于大腸桿菌選擇性增菌培養(yǎng)基的是（）A.營養(yǎng)肉湯B.月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（LST）C.腦心浸出液肉湯D.沙氏葡萄糖瓊脂5.MPN（最可能數(shù)）法檢測大腸桿菌時，若3個稀釋度（10?1、10?2、10?3）的陽性管數(shù)分別為3、2、0，查MPN表對應的結(jié)果是（）A.9.5×101CFU/gB.2.2×102CFU/gC.4.6×102CFU/gD.1.1×103CFU/g6.大腸桿菌PCR檢測的常用靶基因是（）A.16SrRNA基因B.uidA基因（編碼β-葡萄糖醛酸酶）C.18SrRNA基因D.腸毒素基因7.檢測水樣中的大腸桿菌時，若采用濾膜法，濾膜應接種于（）培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。A.營養(yǎng)瓊脂B.mFC培養(yǎng)基（改良的遠藤氏培養(yǎng)基）C.血瓊脂D.巧克力瓊脂8.關于大腸桿菌檢測的質(zhì)量控制，下列說法錯誤的是（）A.每批培養(yǎng)基需做無菌試驗B.陽性對照菌株可選用ATCC25922C.陰性對照應無任何菌落生長D.樣品稀釋液可使用生理鹽水，無需調(diào)節(jié)pH9.某乳制品企業(yè)檢測原料乳的大腸桿菌，若采用平板計數(shù)法，培養(yǎng)溫度和時間應為（）A.30℃，24hB.35℃，48hC.37℃，24hD.42℃，72h10.下列情況中，可判定樣品大腸桿菌“未檢出”的是（）A.所有稀釋度的乳糖發(fā)酵管均未產(chǎn)氣B.分離平板未出現(xiàn)典型菌落C.生化試驗中靛基質(zhì)試驗（I）陰性D.PCR擴增未出現(xiàn)目標條帶二、填空題（每空1分，共20分）1.大腸桿菌屬于______科，其典型生化反應為：乳糖發(fā)酵______（產(chǎn)酸/不產(chǎn)酸）、靛基質(zhì)試驗______（陽性/陰性）、甲基紅試驗______（陽性/陰性）、VP試驗______（陰性/陽性）、檸檬酸鹽利用試驗______（陰性/陽性）。2.GB4789.38-2012規(guī)定，大腸桿菌計數(shù)的方法包括______法和______法；其中______法適用于大腸菌群數(shù)量較少的樣品。3.乳糖膽鹽發(fā)酵管中添加膽鹽的作用是______，溴甲酚紫作為______指示劑，當發(fā)酵產(chǎn)酸時顏色變?yōu)開_____。4.分離大腸桿菌的選擇性培養(yǎng)基除伊紅美藍瓊脂外，還包括______（列舉1種）；該培養(yǎng)基通過添加______（成分）抑制革蘭氏陽性菌生長。5.分子生物學檢測大腸桿菌時，需提取樣品中的______，經(jīng)______反應擴增靶基因，通過______（技術(shù)）判斷擴增結(jié)果。6.檢測過程中，若懷疑培養(yǎng)基被污染，應進行______試驗；若陽性對照無反應，可能的原因是______（列舉1種）。7.某樣品經(jīng)MPN法檢測，接種3個稀釋度（10?1、10?2、10?3）各5管，陽性管數(shù)分別為5、3、1，查MPN表（5管法）對應的結(jié)果為______MPN/g（參考值：當陽性管數(shù)組合為5-3-1時，MPN值為110）。三、判斷題（每題2分，共20分。正確填“√”，錯誤填“×”）1.大腸桿菌是嚴格需氧菌，因此培養(yǎng)時需嚴格通入氧氣。（）2.所有能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性桿菌均可判定為大腸桿菌。（）3.檢測食品樣品時，若樣品含防腐劑，需在稀釋液中添加中和劑（如卵磷脂、吐溫80）。（）4.MPN法的結(jié)果表示為“最可能數(shù)”，其實質(zhì)是基于概率統(tǒng)計的估算值。（）5.伊紅美藍瓊脂中，伊紅和美藍的作用是抑制革蘭氏陽性菌，同時與大腸桿菌代謝產(chǎn)物結(jié)合顯色。（）6.大腸桿菌檢測中，前增菌的目的是恢復受損菌體的活性，提高檢出率。（）7.采用qPCR檢測大腸桿菌時，Ct值越小，說明樣品中目標菌數(shù)量越多。（）8.檢測水樣時，濾膜法的優(yōu)點是可直接計數(shù)，缺點是對渾濁水樣需預處理。（）9.若樣品的大腸桿菌檢測結(jié)果為“110MPN/g”，表示每克樣品中恰好含有110個大腸桿菌。（）10.實驗室廢棄物（如陽性菌液）需經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘后再處理。（）四、簡答題（每題8分，共40分）1.簡述大腸桿菌作為糞便污染指示菌的主要依據(jù)。2.比較MPN法和平板計數(shù)法檢測大腸桿菌的優(yōu)缺點。3.列舉大腸桿菌生化鑒定的關鍵試驗（至少4項），并說明每項試驗的判斷標準。4.簡述使用顯色培養(yǎng)基檢測大腸桿菌的原理及操作要點。5.檢測過程中若出現(xiàn)假陽性結(jié)果，可能的原因有哪些？如何避免？五、綜合分析題（每題10分，共20分）1.某食品企業(yè)送檢一批嬰幼兒配方奶粉，要求檢測大腸桿菌。實驗室按GB4789.38-2012操作，步驟如下：①稱取25g樣品，加入225mL無菌磷酸鹽緩沖液（PBS），均質(zhì)后制成10?1稀釋液；②取10?1、10?2、10?3稀釋液各1mL，分別接種于3管乳糖膽鹽發(fā)酵管（每管9mL），36℃±1℃培養(yǎng)24h；③觀察發(fā)酵管產(chǎn)氣情況，記錄陽性管數(shù)為：10?1（3/3管產(chǎn)氣）、10?2（2/3管產(chǎn)氣）、10?3（0/3管產(chǎn)氣）；④從陽性管中取菌液劃線接種伊紅美藍瓊脂，36℃±1℃培養(yǎng)24h，觀察到紫黑色帶金屬光澤菌落；⑤挑取典型菌落進行生化試驗，結(jié)果為：乳糖發(fā)酵（+）、靛基質(zhì)（+）、甲基紅（+）、VP（-）、檸檬酸鹽（-）。問題：（1）根據(jù)MPN表（3管法），計算該樣品的大腸桿菌MPN值（參考：陽性管數(shù)組合3-2-0對應MPN值為95）；（2）結(jié)合生化試驗結(jié)果，判斷是否為大腸桿菌，并說明依據(jù)；（3）若該奶粉的大腸桿菌限值為“≤10MPN/g”，判定該樣品是否合格。2.某實驗室使用PCR法檢測水樣中的大腸桿菌，實驗步驟如下：①取100mL水樣，通過0.45μm濾膜過濾，收集濾膜；②將濾膜放入提取管，加入裂解液，離心后取上清作為DNA模板；③配制PCR反應體系（含引物、dNTP、Taq酶、模板DNA）；④進行PCR擴增（95℃預變性5min，95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35個循環(huán)，最后72℃延伸10min）；⑤擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察條帶。問題：（1）步驟①中使用濾膜過濾的目的是什么？（2）PCR引物設計需遵循哪些原則（至少3項）？（3）若電泳結(jié)果無目標條帶，但陽性對照有條帶，可能的原因有哪些？（至少3項）答案一、單項選擇題1.D2.C3.D4.B5.A6.B7.B8.D9.C10.A二、填空題1.腸桿菌；產(chǎn)酸；陽性；陽性；陰性；陰性2.平板計數(shù)；MPN；MPN3.抑制革蘭氏陽性菌；pH；黃色4.麥康凱瓊脂；膽鹽（或結(jié)晶紫）5.DNA；PCR；瓊脂糖凝膠電泳（或qPCR定量）6.無菌；引物失效（或模板降解、擴增條件錯誤）7.110三、判斷題1.×2.×3.√4.√5.√6.√7.√8.√9.×10.√四、簡答題1.主要依據(jù)：①大腸桿菌在人及溫血動物糞便中大量存在，數(shù)量遠多于致病菌；②在外界環(huán)境中存活時間與腸道致病菌相近；③檢測方法成熟，易于操作；④對消毒劑的抗性與致病菌相似，可反映消毒效果。2.MPN法優(yōu)點：適用于菌量少、雜菌多的樣品；無需嚴格分離純化；結(jié)果通過概率統(tǒng)計計算。缺點：操作繁瑣，耗時長；結(jié)果為估算值，精度較低。平板計數(shù)法優(yōu)點：直接計數(shù)，結(jié)果直觀；可觀察菌落形態(tài)；適合菌量較高的樣品。缺點：對受損菌或形態(tài)不典型菌株易漏檢；需嚴格控制培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。3.關鍵試驗及判斷標準：①乳糖發(fā)酵試驗：產(chǎn)酸產(chǎn)氣（+）；②靛基質(zhì)（吲哚）試驗：加入柯氏試劑后上層呈紅色（+）；③甲基紅（MR）試驗：培養(yǎng)基呈紅色（+）；④VP試驗：加入甲、乙試劑后呈紅色（+），大腸桿菌為陰性；⑤檸檬酸鹽利用試驗：培養(yǎng)基變藍（+），大腸桿菌為陰性。4.原理：顯色培養(yǎng)基含特異性顯色底物（如5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷，X-Gluc），大腸桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖醛酸酶可分解底物，提供有色產(chǎn)物，使菌落呈現(xiàn)特定顏色（如藍色或紫色）。操作要點：①培養(yǎng)基需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免顯色底物分解；②接種量適宜，避免菌落重疊；③培養(yǎng)溫度和時間嚴格控制（通常36℃±1℃，24h）；④需同時做陽性和陰性對照。5.假陽性原因：①培養(yǎng)基污染（如雜菌生長）；②樣品中存在其他能發(fā)酵乳糖的革蘭氏陰性菌（如克雷伯菌）；③生化試驗操作錯誤（如試劑失效、培養(yǎng)時間不足）；④PCR檢測中引物非特異性擴增。避免措施：①嚴格無菌操作，培養(yǎng)基做無菌試驗；②分離后進行完整生化鑒定（如IMViC試驗）；③定期校準儀器，使用標準菌株作為對照；④優(yōu)化PCR引物設計，增加熔解曲線分析（qPCR）。五、綜合分析題1.（1）MPN值=95MPN/g（因樣品稀釋度為10?1、10?2、10?3，對應MPN表3-2-0組合值為95）；（2）是大腸桿菌。依據(jù)：生化試驗符合大腸桿菌典型特征（乳糖發(fā)酵+、靛基質(zhì)+、甲基紅+、VP-、檸檬酸鹽-）；（3）不合格（95MPN/g>10MPN/g）。2.（1）濃縮水樣中的大腸桿菌，提高檢測靈敏度；（2）引物原則