《動物藥學》-四真實踐項目-溶血性試驗

受試物致敏實驗一、項目基礎信息模塊核心內容項目名稱江蘇華創譽通醫學檢驗有限公司藥物溶血性試驗（體外試管法）合作雙方校方：江蘇農牧科技職業學院生物醫藥學院 企業：江蘇華創譽通醫學檢驗有限公司參與人員校方：王婧、陳曉蘭、王帥兵企業：實驗動物部導師2人項目目標學生：掌握體外試管法檢測藥物溶血性；能開展體外藥物溶血性試驗；會根據觀察結果對藥物溶血性進行判斷。校方：將行業實際檢測需求融入教學，完善課程案例庫。企業：完成供試品的體外溶血性檢測，驗證現有實驗方法的可重復性，儲備實驗操作人才。二、項目方案【項目說明】溶血性是指藥物制劑引起的溶血和紅細胞凝聚等反應。溶血性反應包括免疫性溶血與非免疫性溶血。免疫性溶血是藥物通過免疫反應產生抗體而引起的溶血，為Ⅱ型和Ⅲ型過敏反應；非免疫性溶血包括藥物為誘發因素導致的氧化性溶血和藥物制劑引起血液穩態的改變而出現的溶血和紅細胞凝聚等。溶血性試驗是觀察受試物是否能夠引起溶血和紅細胞凝聚等反應。凡是注射劑和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反應的其他藥物制劑均需要進行溶血性試驗。【儀器與試劑】新鮮兔血、三角瓶、移液器、生理鹽水、試管若干、供試品。【操作流程】序號操作步驟具體操作內容1血細胞懸液的制備取兔血20mL，放入含玻璃珠的三角燒瓶中振搖10分鐘，或用玻璃棒攪動血液，除去纖維蛋白原，使成脫纖血液。加入10倍量生理鹽水，1000-1500r/min離心15分鐘，除去上清，沉淀紅細胞再用生理鹽水按上述方法洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，用生理鹽水配成2％的混懸液備用。2受試物準備臨床用于非血管內途徑給藥的注射劑，以其說明書規定的臨床使用濃度，用0.9%氯化鈉溶液1∶3稀釋后作為供試品溶液；用于血管內給藥的注射劑以使用說明書規定的臨床使用濃度作為供試品溶液。3試驗取潔凈試管7只，進行編號，1-5號管為供試品管，6號管為陰性對照管，7號管為陽性對照管。按下表所示依次加入2%紅細胞懸液、0.9%氯化鈉溶液或蒸餾水，混勻后，立即置37℃±0.5℃的恒溫箱中進行溫育，開始每15min觀察1次，1小時后，每隔1小時觀察1次，一般觀察3小時。按下列順序加入各種溶液：單位為mL試管編號12345672%紅細胞懸液2.52.52.52.52.52.52.5生理鹽水2.02.12.22.32.42.5蒸餾水2.5受試物0.50.40.30.20.14結果觀察①若試驗中的溶液呈澄明紅色，管底無細胞殘留或有少量紅細胞殘留，表明有溶血發生②若紅細胞全部下沉，上清液體無色澄明，表明無溶血發生。③若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，振搖后不分散，表明有紅細胞凝聚發生。如有紅細胞凝聚的現象，將凝聚物放在載玻片上，在蓋玻片邊緣滴加2滴生理鹽水，置顯微鏡下觀察，凝聚紅細胞能被沖散者為假凝聚，若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為真凝聚。【數據記錄與報告】供試品名稱：批號：檢查項目

檢驗依據化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則結果觀察組別觀察結果供試品A供試品B標準規定若受試物管中的溶液在3小時內不發生溶血和凝聚，則受試物可以注射使用；若受試物管中的溶液在3小時內發生溶血和（或）凝聚，則受試物不宜注射使用。結論根據試驗觀察結果，判定供試品A￡可以￡不可以注射使用；供試品B￡可以￡不可以注射使用。操作人：復核人：【考核評價】考核項目考核要點評分標準評價主體分值得分職業態度具備藥物檢測人員的職業技能素養（1）具備依標檢測的職業素養（2）具備團隊協作和合理評價的能力企業導師校內導師15

操作規范實驗準備實驗所需材料準備正確、齊全企業導師5紅細胞懸液制備（1）紅細胞洗滌時無溶血（2）白細胞等去除完全（3）最終稀釋倍數準確企業導師20供試品制備供試品稀釋正確企業導師10試驗操作臺面整潔、有序各管加液準確原始記錄及時、規范企業導師20

結果判定結果觀察能根據試驗結果判定供試品是否溶血或凝集校內導師企業導師20

結論能結合實驗結果判定供試品是否適合注射使用校內導師企業導師10

三、項目評分本實驗考核采用校企雙導師聯合評分機制，雙方依據不同考核重點分工評分，具體如下：企業導師：聚焦學生實操能力，重點評估實驗過程中的動手操作能力，對結果的判斷及問題解決能力，評分占比60%。校內導師：聚焦學生理論與成果梳理能力，重點評估實驗報告完整性及理論掌握程度，評分占比40%。四、項目保障1.技術與資源保障：企業提供符合行業檢測要求的實驗動物，供試品等；校方提供實驗理論指導，協助解決技術難題。2.安全保障：校企共同開展