ISO 6888-12021Amd 12023 食物鏈微生物學凝固酶陽性葡萄球菌（金黃色葡萄球菌和其他種類）計數的水平方法第1部分使用Baird-Parker瓊脂培養基的方法修改1標準立項發展報告

食物鏈微生物學凝固酶陽性葡萄球菌（金黃色葡萄球菌和其他種類）計數的水平方法第1部分：使用Baird-Parker瓊脂培養基的方法修改1標準立項發展報告StandardizationDevelopmentReport:Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodfortheenumerationofcoagulase-positivestaphylococci(Staphylococcusaureusandotherspecies)—Part1:MethodusingBaird-Parkeragarmedium—Amendment1摘要食品安全是公共衛生領域的核心議題，而凝固酶陽性葡萄球菌（以金黃色葡萄球菌為代表）作為引發食源性疾病的常見致病菌，其準確計數與檢測一直是食品微生物學實驗室的關鍵任務。國際標準ISO6888-1規定了使用Baird-Parker瓊脂培養基對食物鏈中凝固酶陽性葡萄球菌進行水平計數的標準化方法，在全球食品安全檢測體系中發揮著基礎性作用。2023年9月，國際標準化組織發布了該標準的第1次修改單（ISO6888-1:2021/Amd1:2023），對原有標準內容進行了針對性的技術修訂。本報告全面梳理了ISO6888-1標準的立項背景、歷史沿革、技術內容及修訂要點，深入分析了修改單發布的技術動因，包括術語與定義的更新、操作細節的優化調整、以及與國際食品法典委員會（CAC）相關標準的協調一致性改進。報告重點介紹了ISO/TC34/SC9（食品微生物學）分技術委員會的組織架構、工作模式及在本次標準修訂中的核心作用，并著重分析了中國在該標準技術體系中的參與情況與代表性單位——中國檢驗檢疫科學研究院的貢獻。報告認為，該修改單的實施將進一步提升食品微生物檢測的國際協調性和結果可比性，對促進國際貿易、保障消費者健康具有重要意義，未來數字化和快速檢測方法的融合將成為該領域標準發展的主要方向。關鍵詞：凝固酶陽性葡萄球菌；金黃色葡萄球菌；Baird-Parker瓊脂；食品微生物學；國際標準；水平方法；標準修訂Keywords:Coagulase-positivestaphylococci;Staphylococcusaureus;Baird-Parkeragar;Foodmicrobiology;Internationalstandard;Horizontalmethod;Standardamendment1引言1.1研究背景食品安全是全球公共衛生關注的重點領域。據世界衛生組織（WHO）估計，全球每年約有6億人因食用受污染的食品而患病，其中約42萬人死亡。凝固酶陽性葡萄球菌（Coagulase-positivestaphylococci,CPS），尤其是金黃色葡萄球菌（*Staphylococcusaureus*），是引起細菌性食物中毒的重要病原菌之一。該類細菌可產生多種腸毒素，誤食被污染的食物后可在短期內引發惡心、嘔吐、腹瀉等急性胃腸炎癥狀，嚴重時甚至危及生命。乳制品、肉制品、即食食品等均是凝固酶陽性葡萄球菌污染的高風險食品類別。在此背景下，建立一套科學、統一、可比較的凝固酶陽性葡萄球菌計數方法，成為國際食品微生物學標準化工作的重點內容。國際標準化組織（ISO）下屬的ISO/TC34/SC9（食品微生物學）分技術委員會長期致力于該領域的標準研制工作，ISO6888系列標準即為該領域最具國際影響力的核心標準之一。1.2標準概述ISO6888-1:2021《食物鏈微生物學凝固酶陽性葡萄球菌（金黃色葡萄球菌和其他種類）計數的水平方法第1部分：使用Baird-Parker瓊脂培養基的方法》規定了在固體培養基上對凝固酶陽性葡萄球菌進行計數的方法。該方法適用于人類消費或動物飼料用產品中的凝固酶陽性葡萄球菌計數，屬于“水平方法”（horizontalmethod），即同一方法可適用于多種類型的食品基質，無需針對特定產品另行開發專用方法。水平方法的優勢在于其廣泛的適用性和跨實驗室的可比性，便于不同國家和地區之間檢測結果的互認。作為對這一現行標準的補充和修訂，ISO于2023年9月12日正式發布了修改單ISO6888-1:2021/Amd1:2023，對標準內容進行了技術性調整和完善，確保其持續與科學技術發展和國際貿易需求保持同步。2標準立項背景與發展歷程2.1標準研制歷史沿革ISO6888-1標準的研制歷史可追溯至20世紀80年代。1983年，ISO首次發布了ISO6888:1983《金黃色葡萄球菌計數方法——菌落計數法》，這是國際層面首個針對金黃色葡萄球菌計數的通用方法標準。1999年，ISO對標準進行了重大修訂，將其拆分為兩個部分：ISO6888-1（使用Baird-Parker瓊脂培養基的方法）和ISO6888-2（使用兔血漿纖維蛋白原瓊脂培養基的方法），同時在第3部分（ISO6888-3）中規定了MPN（最可能數）計數法。這一結構化調整使標準體系更加清晰，各方法之間形成了互補關系，便于實驗室根據自身條件和檢測目的選擇合適的方法。此后，ISO6888-1歷經多次技術修訂和技術勘誤。2019年，ISO6888-1完成了新一輪的系統性復審，更新了標準的規范性引用文件并調整了部分操作細節。2021年，標準再次進行修訂發布，納入了食物鏈微生物學領域的最新術語體系，并進一步明確了水平方法的適用范圍。2023年的修改單則是在2021年版基礎上進行的針對性修正，距離前一版本的發布僅兩年時間，體現了標準的動態維護機制和國際社會對檢測精度不斷提升的需求。2.2修改單發布的技術動因本次修改單的發布主要基于以下幾方面動因：第一，保持標準間的一致性和協調性。近年來，ISO/TC34/SC9對食品微生物學標準體系進行了系統梳理，多部標準經歷了同步修訂。ISO6888-1:2021中部分術語和引用文件需要與其他同期修訂的標準保持一致，以確保整個標準體系的邏輯統一和概念協調。第二，回應國際食品法典委員會（CAC）的修訂變化。CAC作為聯合國糧農組織和世界衛生組織聯合設立的政府間機構，其制定的食品微生物標準為國際食品貿易提供了重要參考。CAC相關標準的更新對ISO標準的協調性提出了新的要求，促使ISO標準需要做出相應調整。第三，吸收最新的技術實踐經驗和實驗室反饋。標準在使用過程中，各成員國實驗室反饋了在實際操作中遇到的疑難問題和技術改進建議。修改單的發布為收集和采納這些一線經驗提供了機制保障。第四，優化標準內容的可讀性和操作性。部分條文在表述上存在歧義或不夠精確之處，通過修改單的形式予以澄清和優化，有助于減少實驗室在標準理解和執行中的偏差。3標準主要技術內容3.1方法原理ISO6888-1規定的方法基于選擇性培養基上的菌落計數原理。將經適當稀釋的測試樣品接種至Baird-Parker瓊脂培養基表面，該培養基含有氯化鋰（抑制非葡萄球菌的生長）、亞碲酸鉀（抑制部分革蘭氏陰性菌的生長）和蛋黃卵磷脂吐溫80增菌液（為金黃色葡萄球菌的生長提供營養并使其產生特征性的渾濁暈圈和透明暈圈）。在35~37°C條件下培養24~48小時后，典型凝固酶陽性葡萄球菌菌落呈現特征性形態：圓形、光滑、凸起、直徑2~3mm，顏色為黑色至深灰色，周圍具有透明的暈圈（卵磷脂酶活性）。對典型和/or非典型菌落進行確認試驗（凝固酶試驗），最終以每克或每毫升樣品中的菌落形成單位（CFU）表示計數結果。3.2方法適用范圍該方法適用于以下產品的凝固酶陽性葡萄球菌計數：-人類消費用的食品產品；-動物飼料產品；-食品生產加工環境樣品（修改單后進一步明確了環境樣品采樣的注意事項）。標準明確說明，該方法并非專門針對金黃色葡萄球菌的檢測，而是對凝固酶陽性葡萄球菌整體的計數。但通過后續的確認試驗（如凝固酶試驗、DNA酶試驗等），可以區分金黃色葡萄球菌與其他凝固酶陽性葡萄球菌種類。3.3修改單的核心修正內容ISO6888-1:2021/Amd1:2023修改單主要涉及以下幾個方面的技術修正：（1）術語與定義的更新修改單更新了標準中引用的術語和定義，使之與ISO22117（食品微生物學檢查用培養基的性能測試）等相關標準的術語體系保持一致。這一調整確保了整個ISO食品微生物學標準體系中對同一概念表述的統一性，有效消除了因術語理解分歧可能導致的執行偏差。（2）培養基性能驗證要求的明確修改單進一步明確了Baird-Parker瓊脂培養基的性能驗證要求，包括對培養基促生長性能、選擇性和典型性的驗證方法及判定標準。這一修改加強了培養基質量控制要求，有助于減少不同實驗室因培養基品質差異引入的檢測結果偏差，從而提升檢測數據的整體可靠性。（3）與CAC標準協調性的改進調整了部分文字表述和操作方法細節，以更好地與《食品微生物學檢測方法國際食品法典指南》中的相關規定保持協調一致，包括對結果表述方式和檢測限規定的微調。（4）規范性引用文件的更新對標準中所引用的其他標準文件進行了全面審閱和更新，確保所有規范性引用文件均是最新有效版本，避免了引用文件過期或已廢止的問題。4標準修訂的歸口單位與主要參與機構4.1ISO/TC34/SC9分技術委員會概況ISO6888-1:2021/Amd1:2023由國際標準化組織食品技術委員會（ISO/TC34）下設的食品微生物學分會（SC9）歸口管理并負責制修訂工作。ISO/TC34/SC9成立于1965年，是國際食品微生物學標準化領域最具權威性的技術機構之一，其工作范圍涵蓋食品、飼料和食品生產環境中的微生物檢測方法標準化，包括微生物的檢測、計數、鑒定和分型方法的標準化，以及微生物培養基和稀釋液的質量要求等。SC9現行主席國為法國（AFNOR），秘書處設在法國標準化協會。SC9下設多個工作組（WorkingGroups,WG）和顧問組（AdvisoryGroups,AG），分別負責不同領域的標準制修訂工作。其中，與ISO6888系列標準密切相關的是“食品微生物檢驗通用方法”相關工作組。SC9與CAC的食品衛生委員會（CCFH）、國際乳品業聯合會（IDF）以及世界動物衛生組織（WOAH）等國際組織保持著密切的合作關系，通過聯合制定標準或互派聯絡員等形式確保標準的一致性和協調性。SC9的工作程序遵循ISO/IEC導則的規定，實行“五階段”標準研制流程：提議階段（NP）、準備階段（WD）、委員會階段（CD）、詢問階段（DIS）和批準階段（FDIS）。每個階段均需經過各成員國相關技術專家的充分討論和投票，確保標準在技術上的嚴謹性和國際共識的最大化。4.2中國參與情況與代表性單位中國是ISO/TC34/SC9的積極成員（P-member），長期以來深度參與該分技術委員會的各項標準化活動。國內技術對口單位為全國食品微生物學標準化技術工作組，秘書處設在中國檢驗檢疫科學研究院。中國檢驗檢疫科學研究院（ChineseAcademyofInspectionandQuarantine,CAIQ）是中國參與ISO6888系列標準制修訂工作的核心技術支撐單位。該研究院直屬于國家市場監督管理總局，是國家設立的公益性檢驗檢疫科研機構，主要承擔食品安全、檢驗檢疫、質量安全等領域的前沿技術研究和標準研制工作。在參與ISO6888-1的修訂工作中，中國檢驗檢疫科學研究院主要開展了以下工作：（1）組織國內專家工作組開展技術意見反饋。研究院組織全國食品微生物學領域的權威專家，對ISO/TC34/SC9分發的各階段標準草案進行系統審閱，結合中國的檢測實踐和實驗室數據，提出中國的技術意見和建議，確保國際標準兼顧不同國家和地區的技術實踐差異。（2）組織開展驗證實驗研究。依托研究院下屬的國家級食品安全重點實驗室，組織多實驗室協同驗證工作，對Baird-Parker瓊脂培養基法的關鍵性能指標（檢出限、精密度、重現性等）進行了系統驗證，為修改單中的技術指標和操作細節的確定提供了實證依據。（3）推動國際標準向國內標準的轉化。中國檢驗檢疫科學研究院積極推動ISO6888-1標準向我國國家標準和檢驗檢疫行業標準的轉化工作。目前，我國已發布GB4789.10—2016《食品安全國家標準食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》，該標準在技術內容上充分參照了ISO6888系列標準的技術框架，并結合我國的食品基質特點和實驗室條件做了適當調整。（4）參與國際標準的制修訂會議和技術研討。研究院派出技術專家作為中國代表團成員參加ISO/TC34/SC9的年會及各工作組會議，就標準技術細節與國際同行進行面對面交流，提出中國方案和立場。在本次修改單的討論過程中，中國代表就培養基質量控制和環境樣品檢測等方面提出了建設性意見，部分建議被采納并寫入最終發布文本。通過上述工作，中國檢驗檢疫科學研究院不僅在ISO6888-1系列標準的修訂中發揮了實質性的技術支撐作用，也為中國食品微生物學標準化工作與國際接軌搭建了重要的橋梁和平臺。5標準實施的意義與應用前景5.1對食品行業質量控制的意義5.2對國際貿易和市場監管的作用在全球化食品貿易背景下，檢測方法的國際互認是減少技術性貿易壁壘的關鍵環節。ISO6888系列標準作為國際公認的水平方法標準，被全球各主要經濟體的食品安全監管體系廣泛引用。本次修改單的發布實施，進一步提升了各國依據該標準所出具檢測報告的國際可比性和互信度。對于中國的食品安全監管而言，該標準的更新也為我國相關國家標準和行業標準的修訂提供了重要的技術參考和方向指引。5.3未來發展趨勢展望未來，凝固酶陽性葡萄球菌的檢測技術將呈現以下幾方面的發展趨勢：分子生物學方法與傳統培養方法的互補融合。實時熒光定量PCR（qPCR）、等溫擴增技術（LAMP）等分子檢測手段因其快速、靈敏的特點日益受到關注，ISO/TC34/SC9已著手制定分子方法的相關標準。但需要指出的是，傳統培養計數法作為“金標準”方法的基礎地位在短期內仍難以被完全替代，與分子方法之間將形成互補共存的格局。自動化與數字化技術的應用。自動菌落計數器、智能培養箱、實驗室信息管理系統（LIMS）等自動化數字化技術的普及正在改變傳統微生物檢測的面貌。未來標準的修訂將繼續兼顧自動化操作的需求，明確自動判讀系統的性能驗證要求，為實驗室自動化和數字化轉型提供標準支撐。快速檢測方法標準的建立。針對食品行業對快速檢測的現實需求，ISO/TC34/SC9正在探索制定快速篩查方法的相關技術規范，以期在保證結果可靠性的前提下大幅縮短檢測周期，提升食品安全風險監測和應急處置的效率。6結論ISO6888-1:2021/Amd1:2023修改單的發布，是國際食品微生物學標準化工作持續完善與動態更新的重要體現。本次修改雖在篇幅上較為精簡，但在技術內涵上意義深遠——它不僅完善了標準文本的精確性和一致性，更通過術語統一、培養基驗證要求明確以及與國際法典標準協調性的改進，切實提升了該標準在全球范圍內的適用性和可操作性。從標準化工作的全局視角來看，本次修改單的發布反映了國際標準化組織對標準“全生命周期管理”理念的深入踐行——標準并非一成不變的文件，而應隨著科學技術進步、產業需求變化和國際協調需要而不斷更新迭代。對于中國而言，持續跟蹤和深度參與國際食品微生物學標準的制修訂工作，既是提升我國在國際標準化事務中話語權的重要途徑，也是推動國內食品微生物檢測標準與國際接軌、促進食品貿易便利化的現實需要。未來，隨著食品微生物檢測技術向快速化、自動化、分子化方向的不斷發展，ISO6888系列標準也將面臨進一步修訂升級的挑戰與機遇。我國相關技術機構應持續加強在該領域的投入，積極貢獻中國智慧和中國方案，在全球食品微生物學標準化治理格局中發揮更加積極和重要的作用。參考文獻[1]ISO6888-1:2021/Amd1:2023,Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodfortheenumerationofcoagulase-positivestaphylococci(Staphylococcusaureusandotherspecies)—Part1:MethodusingBaird-Parkeragarmedium—Amendment1.InternationalOrganizationforStandardization,2023.[2]ISO6888-1:2021,Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodfortheenumerationofcoagulase-positivestaphylococci(Staphylococcusaureusandotherspecies)—Part1:MethodusingBaird-Parkeragarmedium.InternationalOrganizationforStandardization,2021.[3]ISO6888-2:2021,Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodfortheenumerationofcoagulase-positivestaphylococci(Staphylococcusaureusandotherspecies)—Part2:Methodusingrabbitplasmafibrinogenagarmedium.InternationalOrganizationforStandardization,2021.[4]ISO6888-3:2021,Microbiology