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李屬壞死環斑病毒檢測規程Criterionforprunusnecroticringspot布發2015-08-01實施I本標準按照GB/T1.1—2009給出的規12取樣酶標儀(配405nm濾光片),恒溫培養箱(溫度可調范圍0℃~40℃),生物培養箱(具光照、溫度可調范圍0℃~50℃),電子天平(感量為0.01g、0.0001g),酸度計。微量移液器(200μL～1000μL,碳酸氫鈉(NaHCO?)2.93g無水磷酸二氫鉀(KH?PO?)3.1.3.5樣品提取緩沖液(GEB,pH7.4,貯藏于4℃)2NaN?3同3.1.4.3。每孔加入100μL配制好的底物溶液。酶標板用保鮮膜包好放入濕盒中21℃~24℃下蔽光顯色30β=|OD4o5-1-OD4o5-2|/(OD??5-1+OD?o5-2)×2×100(OD?05-1和OD?o5-2為同一試樣重復的吸光稱取0.252gNa?SO?溶于預先配制好的0.01mol/LPBS緩沖液(稱取0.8g氯化鈉，0.02g氯化每檢測樣品的指示植物栽植數量≥5株。于專用隔離溫室，將健康種子播種于經過消毒的富含有機質土壤的花盆中，盆間距50cm×50cm,待有4真葉～6真葉后準備接種。栽植環境條件為溫度為20℃~25℃,光照時數為12h。將待測樣品按1:3(g/mL)的比例與接種緩沖液混合研磨，用細紗布過濾勻漿液，在1000g~10000g下離心10min～15min后取上清液。接種時，在3.2.3準備的指示植物葉面撒少量600目金指示植物接種2個~3個葉片且只接種一個樣品，并設陽性對照(帶毒植株)、陰性對照(健康植株)和空4中文名

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