2-7動物微生物-病料的觸片染色及細菌的分離培養(yǎng)(實驗三)

實驗三

病料的觸片染色及細菌的分離培養(yǎng)

一.實驗目的與要求1.培養(yǎng)無菌操作的意識2.掌握病料的正確觸片及美蘭染色方法3.掌握病料細菌分離的操作步驟及其分區(qū)劃線二.實驗儀器及材料1.儀器：恒溫箱、顯微鏡等2.實驗材料：培養(yǎng)基：麥康凱培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）病料：豬肺、肝臟、脾臟等酒精燈、接種環(huán)、剪刀、接種環(huán)、鑷子等染色液：美蘭染色液三.內(nèi)容與方法1.病料觸片染色：灼燒剪刀、鑷子從病料上剪取小塊組織→→用新鮮切面在干凈載玻片上輕觸3～4個觸面→→自然干燥→→美蘭染色。2.美蘭染色步驟：觸片經(jīng)過火焰固定→→滴加適量美蘭染色液覆蓋涂面→→染色3分鐘→→晾干→→鏡檢→→菌體呈藍色。用滅菌的烙刀（趁熱）對病料的表面進行滅菌→→用滅菌的剪刀在病料上滅過菌的地方剪一切口→→接種環(huán)滅菌，從切口取細菌→→無菌操作進行平板分區(qū)劃線→→用過的剪刀、鑷子、烙刀、接種環(huán)等燒灼滅菌→→平板放入恒溫箱中18-24小時→→觀察培養(yǎng)后的細菌菌落性狀。3.病料中細菌的分離培養(yǎng)：4.分區(qū)劃線①右持接種環(huán)，燒灼冷卻后，蘸取劃線。②左手抓握瓊脂平板，在酒精燈火焰左上方，使平板面向火焰，右手將已沾的病料接種環(huán)在瓊脂表面分區(qū)劃線③劃線完畢，將接種環(huán)燒灼。④將平板倒扣并做標記，培養(yǎng)。劃線及其結果分區(qū)劃線有單菌落劃線模示圖有單菌落四.結果及分析討論1病料觸片染色結果及其分析2細菌培養(yǎng)結果及其分析培養(yǎng)基的制備1肉膏湯培養(yǎng)基成分：牛肉膏1g，蛋白胨1g，氯化鈉1g，蒸餾水200mL。制法：將牛肉膏，蛋白胨，氯化鈉，加蒸餾水至200mL，矯正PH7.4～7.6,121.3℃滅菌20min即可.2營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分：牛肉膏1g，蛋白胨1g，氯化鈉1g，瓊脂粉5g，蒸餾水200mL。補充制法：將上述成份用水溶解后，矯正PH7.4～7.6,121.3℃滅菌20min即可，冷卻到不燙手，倒平板。補充棉塞﹑棉球制備及玻璃器皿清洗1.棉塞制備：每人制一個2.棉球制備：每人制50個3.玻璃器皿清洗

2%鹽酸浸泡過夜清水沖洗2次，烘干。參考課本227頁。補充滅菌鍋安全閥放氣閥壓力表設定時間溫度按鍵蓋子補充原理：在密閉的蒸鍋內(nèi)，蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。

。補充注意：滅菌鍋內(nèi)冷空氣要排除：原因空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，當水蒸汽中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度補充使用步驟1將內(nèi)層滅菌桶取出，加入適量的水。2．放回滅菌桶，裝入待滅菌物品。

3．加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。4.0.05MPa時切斷電源排氣